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DNA提取

样品收集：取新鲜植物叶片（大约250mg）于冻存管中，向管中加

入1大4小的钢珠，液氮中冷冻5分钟，之后取出剧烈振摇，待样

品被研细后用磁铁将钢珠吸出，样品冻存于-80℃，钢珠用无水乙醇

洗涤后用于下一次样品收集。

溶液配制：

溶液A：100mMTris

100nMNaCl

10mMEDTA

1%十二烷基肌氨酸钠

0.1%NaSO3

2%聚乙烯吡咯烷酮

调节PH至8.5

溶液B；酚-氯仿-异戊醇（25：24：1）

溶液C：硅胶基质

溶液D：3MNaAc（pH4.8）

溶液E：异丙醇

溶液F：70％的乙醇

溶液G：含有40ug/ml的TE缓冲液

TE缓冲液(10mMTris,1mMEDTA,[pH8])

步骤：

1、取出液氮中冻存的样品于2ml离心管中，加入700ul的溶液A，

涡旋振荡1分钟

2、加入700ul溶液B，800转/分振荡器震荡10分钟。

3、加入500ul溶液C，混匀后3200g离心10分钟。

4、上层相液体移入1.5ml离心管，加入60ul溶液D和600ul溶液E，

涡旋振荡2分钟。

5、3200g离心2分钟。

6、上清倒出，用500ul溶液F洗涤DNA。

7、离心弃洗液后，干燥DNA。

8、加入60ul溶液G后于4℃过夜溶解DNA。

总RNA提取

准备工作（试剂配置和器材准备）

实验所用的研臼,杵,小药勺,试剂瓶,量筒，剪刀等与实验材料

有接触的器皿都要在0.1%的DEPC水中浸泡24h，用锡纸包

裹于180℃（烘箱）高温灭菌2h或160℃高温灭菌4h后备用；

塑料制品如进口tip头、eppendorf管(1.5ml,0.5ml)高压灭

菌,烘干后备用(放置时间不宜超过一周)。RNase-freewater

的制备如下：在蒸馏水中加入0.1%体积的DEPC原液（如

1000ml蒸馏水中加1mlDEPC原液）,用塑料膜封口后，充

分混匀,静置过夜,高压灭菌.(注意:DEPC有强诱癌作用,操作

时须谨慎,加了DEPC的水放通风橱中,避免吸入气体)

三、实验操作步骤

1）称取0.5g植物材料,用液氮速冻后，迅速研磨成细粉,分装

于两个1.5ml的eppendorf离心管中

注意：动作尽量迅速,避免RNA降解；另外，要尽量地选用幼

嫩的植物材料，因其RNA的含量相对于老材料要丰富。

2）加入1mlTRIzol，用力摇动使混合均匀,室温下放置5min

（混合液呈棕红色，可分成三大层：上层水相中含有RNA，

中层含蛋白和下层有机相为材料残渣及DNA等）

注意：样品的量不要超过TRIzol体积的10%，过多反而会降

低RNA的得率。

3）（此步可根据实际情况选择做还是不做）当样品中蛋白、

脂肪及多糖含量较高时,离心（4℃,12,000g,10min）,小心

将上清液吸入1.5ml的eppendorf离心管中

注意：RNA的抽提过程中的所有离心操作皆在4℃的冷冻离

心机上进行（下同）

4）每管加0.2ml氯仿,用力振荡15sec,室温放置2-3min,离心

(4℃,12,000g,15min)

5）将上清液(约600ul)吸入1.5ml的新eppendorf离心管中,

加等体积异丙醇,颠倒混匀（动作要缓和）,-20℃冰箱中放置

30min（过夜则沉淀更加充分）

6）离心（4℃,12,000g,15min