环境微生物学实验课件.pptVIP

环境微生物学实验;一、实验教学目标基本与要求

1、明确培养基的配制原理。

2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。

二、实验内容

1、介绍培养基的配制原理和方法步骤

2、动手称量试剂、配制牛肉蛋白胨培养基等。

;称量--配置--调节pH值--过滤--分装--灭菌

1.称量

按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。

;3.调节pH值

培养基溶解均匀并冷却至室温时用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHcl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。

4.过滤

用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。;5.分装

将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。

分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：

（1）斜面：装量为管长的1/4-1/5。

（2）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的1/3。

（3）三角瓶：装量不超过容积1/2。;6.灭菌

塞棉塞，包扎，灭菌。

高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于100度的蒸汽温度。;四、实验报告

记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。

五、问题和思考

l．配制培养基有哪几个步骤?在操作过程中应注意些什么问题?为什么?

2．培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌的培养基如何进行无菌检查?;三、实验步骤

（一）干热灭菌法

1、原理

利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

所需温度(160-170℃)，时间长(1-2h)。

注：干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。

2、步骤;（三）紫外线灭菌法

1、原理

紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再使O2氧化生成臭氧或使水氧化生成H2O2。O3和H2O2均有杀菌作用。

适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。

;四、实验报告

记录无菌检查结果

五、问题和思考

1.高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽?灭菌完毕后，为什么待压力

降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物？

2.过滤除菌应注意哪些问题?

;实验四微生物接种技术

一、教学目标与基本要求：

掌握各种微生物接种的基本操作技术。

二、实验内容

1．斜面接种

2．液体接种

3．穿刺接种

4．平板接种;三、实验步骤

将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一无菌的培养基上，这个过程就称为接种。

常用的几种方法如下：

斜面接种

液体接种

穿刺接种

平板接种;1.斜面接种：

从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。此法用于好气性微生物的接种。

左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。;斜面接种示意图;3.穿刺接种：

用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。

4.平板接种：

将菌种接至培养皿的方法，平板接种的目的是观察菌落形态、分离纯化菌种，活菌计数以及在平板上进行各种试验时采用的一种接种方法，可分为下面几种：?

;1)斜面接平板

a.划线法：见平板划线分离法。

b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细胞，轻轻点在平板的表面（根霉点一点，曲霉、酵母可点3-4点）即可。?

2)平板接斜面：一般是将经平板分散培养得到的单菌落接种到斜面，以便作鉴定或扩大培养、保存之用。?;一、实验目标与基本要求：

学习并掌握观察放线菌形态的基本功方法，了解放线菌的形态特征。

二、实验内容：

观察放线菌菌落形态。

三、材料：

1、菌种：白色链霉菌、红色链霉菌。

2、0.1%美蓝染液、载片和盖片。

;四、步骤

1、菌落形态及菌苔特征：

以无菌操作分别取白色链霉菌、红色链霉菌制成菌悬液在平板培养基上用划线法接种，25-28℃培育5-7天，观察菌落的表面形状、大小、颜色和边缘等；并注意放线菌在基质上着生紧密情况。