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病理组织切片技术是病理实验室最基本的方法

病理组织切片技术是病理实验室最基本的方法，是病理学的一项极有使用价值

的专业技能。它包括组织固定、脱水、透明、包埋、切片、漂片、烤片、脱蜡、染

色、脱水、透明和封固等程序。HE染色是既基本又十分重要的工作，HE染色的好

坏直接影响病理医生的正确诊断，而HE染色质量好坏与HE制片的每一步骤关系

都十分密切。只要某一步骤出了问题都直接影响下一步工作，时常会出现个别片子

色调不正、颜色对比不协调、染色不匀、模糊不清等现象，使切片的质量和诊断的

准确性受到影响。本文作者在实验过程中就制作优良动物病理切片的体会阐述如下:

一、取材要及时、规范

(一)要取最新鲜的材料。由于各器官组织坏死变化很快，所以取材要求迅速。

取材时要用锋利的刀片或剪刀，勿用镊子对组织加以压迫，以免组织破裂和变形。

(二)选取组织块的大小、厚薄亦应力求适度。过大、过厚的组织，固定液不宜

渗透，亦可造成固定不佳，过小、过薄的组织又可能在固定或脱水的过程中发生扭

曲变形情况[1]。

(三)应有代表性，能够反映出组织的基本结构，如肝要有肝小叶;肾要有皮质

和髓质;肺要有支气管等。另外，要采取病变部位和健康部位交叉处的组织，这样

才可以通过健康部位的对照，清楚地看到各种病理变化。

二、固定要充分

(一)一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，

以免引起化学变化，失去固定作用。笔者常用的固定液是10,福尔马林溶液。

(二)应及时固定，这样可保持细胞与生活时的形态相似，防止组织自溶而产生

死后变化。将取下的材料立即放在固定液中固定24小时以上，固定液必须充足，

一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1~2次新液。目的是防

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止腐败、保持原有结构并使组织硬化，便于处理。笔者为了让组织块固定充分，常

在此步骤增加一步重新修块和重复固定，做法是修块大小为10mm×10mm×2

mm，然后放入新配制好的10,福尔马林溶液中固定12小时以上，避免了因固定不

充分带来的切片问题，收到很好的效果。

(三)材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外贴上标

签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材

料来源、日期等。标签上的文字，应用黑色

铅笔或绘图黑墨水书写。

(四)材料经固定后，除乙醇外，组织中的固定液必须冲洗干净。因为残留在组

织中的固定液，有的不利于染色，有的产生沉淀或结晶影响观察。冲洗方法根据固

定液的性质而定，固定液为水溶液的常用水洗涤，方法是将组织块放入冲洗盒中，

流水冲洗12小时以上;陈旧的固定时间长的组织应冲洗24小时左右，保证冲洗干

净。

三、脱水、透明要彻底

(一)脱水采用酒精梯度脱水法，让组织块依次经过70%、80%、95%?、95%?、

100%?、100%?等各级酒精溶液中，脱水必须在有盖的玻璃瓶中进行，防止吸收空气

中的水分和酒精挥发，保证脱水彻底。否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混

浊现象。

(二)笔者在实践中得出脱水的时间为70%2小时、80%2小时、95%?1.5小时、

95%?1.5小时、100%?0.5小时、100%?0.5小时，就能达到彻底脱水的效果。如需

过夜，应停留在95%酒精中。在100%酒精中，每级停留的时间不宜太长，否则会使

组织变脆，影响切片。

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