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各类微生物生化实验方式原理

通常利用生化实验的方式，检测细菌对各类物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化

反映，经常使用于细菌的辨别。

一、糖类分解产物

（1）糖发酵实验（carbohydratefermentationtest）不同种类的细菌对糖的分解利用能

力不同，一样以可否分解某种糖，是不是产酸产气等现象来辨别。例如大肠杆菌能分解葡萄

糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。这是因为大

肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。而伤寒杆菌无此酶，

故分解葡萄糖只产酸不产气。

（2）VP实验（Voges-Proskauertest）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，

生成一分子乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二

乙酰可与培育液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反映，生成红色的化合物，此为

VP实验阳性。大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP实验阴性。

（3）甲基红实验（methylredtest）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡

萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。但二者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生

甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。故大肠杆菌

培育液PH在以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红实验阳性；产气杆菌培育液PH在以

上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红实验阴性。

（4）枸橼酸盐利用实验(citrateutilizationtest）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源

的培育基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变成碳酸盐，使培育基由中性变成碱性，含

溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培育基由淡绿色变成深兰色，此为枸橼酸盐利用实验阳性。

大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培育基上不能生长，培育基仍为绿色。

二、蛋白质及氨基酸的分解产物

（1）硫化氢实验（hydrogensulfidetest）有些细菌能分解培育基中的含硫氨基酸（如

胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢

实验阳性。本实验经常使用于区别肠道杆菌的种类。沙门氏菌属一样为阳性;大肠杆菌、产

气杆菌、志贺氏菌为阴性。

（2）明胶液化实验（gelatinliguefactiontest）有些细菌具有明胶酶，能分解明胶使

其失去凝固能力而液化。变形杆菌、霍乱弧菌、绿脓杆菌、枯草杆菌等能液化明胶；大肠杆

菌、沙门氏菌那么不能。

（3）吲哚实验（indoletest）有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成无

色吲哚，加入对-二甲基氨基苯甲醛，无色吲哚生成红色玫瑰吲哚，

为吲哚实验阳性。大肠杆菌、霍乱弧菌等吲哚实验阳性；产气杆菌、伤寒沙门氏菌为吲哚实

验阴性。

吲哚对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚

细菌的生化反映是辨别细菌的重要手腕：其中吲哚实验（I）、甲基红实验（M）、VP实验(V)

和枸橼酸盐利用实验（C），简称为IMVIC实验，经常使用于大肠杆菌与产气杆菌的辨别。

典型的大肠杆菌的IMViC实验结果为“++--”，而产气杆菌是“--++”。

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实验四、微生物的快速鉴定和自动化分析技术

如何使微生物学技术方式快速、准确、简易和自动化，一直是微生物学工作者研究的热点，

尤其是临床医学方面，对微生物的快速准确鉴定，更是尤其是临床医学方面，对微生物的快速准确鉴定，更是时刻时刻确实是生确实是生命命。近20连年来，

随着微电子、运算机、分子生物学、物理、化学等先进技术向微生物学的渗透和多学科的交

叉，这方面已取得了冲破性进展，许多快速、准确、灵敏、简易、自动化的方式技术，不仅

在微生物鉴定中广为利用，而且在微生物学的其它方面也被采纳，推动了微生物学的迅速进

展。

一、微量多项实验鉴定系统

该系统的全然原理是依照微生物生理生化特点鉴定的结果，而进行的数码分类鉴定。这种技

术也称为简易诊检技术，或数码分类鉴定法。它是针对微生物的生理生化特点，配制各类培

育基、反映底物、试剂等，别离微量（约）加入各个分隔室中（或用小圆纸片吸收），冷冻

干燥脱水或不干燥脱水，各分隔室在同一塑料条或板上组成检测卡。实验时加入待检测的某

一种菌液，培育2~48小时，观看鉴定卡上各项反映，按判定表判定实验结果，用此结果

编码，查检索表(依照数码分类鉴定