生物化学实验报告：Western-blotting检测大肠杆菌重组蛋白.pdfVIP

实验三Westernblotting检测大肠杆菌重组蛋白

一、实验目的

利用WesternBlotting技术，定性（或定量）检测苦荞黄酮醇合酶基因（Flavon

olsynthasegene,FtFLS）在大肠杆菌表达宿主菌EscherichiacoliBL(DE3)中的诱

导表达。

二、实验原理

黄酮醇合酶（FLS，EC1.14.11.23）属于2-ODD家族，催化黄酮醇合成支路中

最后一步氧化反应，也是直接合成黄酮醇的反应。FLS可以使二氢黄酮醇在C3链中

C2和C3之间氧化形成双键，从而生成黄酮醇：aDihydroflavonol+2-oxoglutarate

+OaFlavonol+succinate+CO+HO。

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本实验采用PCR的方法，在苦荞黄酮醇合酶基因（FtFLS）ORF起始密码子前

引入KpnІ酶切位点，去掉终止密码并引入BamHІ酶切位点。克隆引入酶切位点

后的