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实验一紫外-可见分光光度计的性能检验
一、实验目的
1.掌握紫外-可见分光光度计性能的检验方法
2.学会UV-1100型紫外-可见分光光度计的使用方法
二、实验原理
分光光度计的性能的好坏,直接影响到测定结果的准确程度。因此,要对仪器进行性能检查,
以保证测定结果的准确性。
三、仪器和试剂
UV-1100型紫外-可见分光光度仪
石英比色皿(一对)
擦镜纸
KCrO溶液KMnO溶液
2274
蒸馏水
四、实验内容及操作步骤
1.比色皿的配对性将蒸馏水注入到比色皿中,以其中一个比色皿作空白,在440nm波长处
分别测定其他各比色皿中的透光率。
2.波长精度的检查用KMnO溶液的最大吸收波长525nm为标准,在待测仪器上测绘KMnO溶
44
液的吸收曲线,若测得的最大吸收波长在5251nm以内,则仪器的波长精度符合使用要求。
3.重复性以0.02mol/L的HSO溶液的透光率为100%,用同一KCrO溶液连续测定7次,求
24227
出极差,如小于0.5%,则重复性符合要求。
4.吸收值的准确度考察取KCrO溶液,在以下波长处测定并计算其吸收系数,并与规定的吸
227
收系数比较,如下表所示,其相对偏差在1%以内,则吸收值的准确度符合要求。
235257313350
波长/cm
(最小)(最大)(最小)(最大)
吸收系数E1%123.0~126.0142.8~146.247.0~50.3105.5~108.5
1cm
五、思考题
1.同种比色皿透光度的差异对测定有何影响?
2.检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义?
实验二、吸收曲线的测绘及吸收系数的测定
一、实验目的
1.掌握测绘吸收曲线的方法
2.学会测定吸收系数
二、实验原理
若溶剂固定不变,化合物吸收曲线所出现的λmax、λmin或λ(S)为一定值,且他们的数目也
一定,从而为鉴别化合物提供了有力的证据。
百分吸收系数是指当溶液浓度为1%,液层厚度为1cm时,指定波长的吸光度。
A
即E1%
1cmC1
三、仪器和试剂
UV-1100型紫外-可见分光光度计
石英比色皿(一对)
100ml烧杯1个
擦镜纸
95%乙醇(A.R)
丹皮酚对照品
四、实验内容及操作步骤
丹皮酚对照品母液的配制:称取丹皮酚对照品10mg,用95%乙醇溶解,定容至10ml,摇匀。吸
取5ml于100ml量瓶内,用95%乙醇定容,作为母液备用,此溶液中丹皮酚的含量为0.005%。
1.吸收曲线的测绘吸取母液1ml于10ml量瓶内,用95%乙醇定容。此时,丹皮酚含量为
0.0005%。将此溶液与空白溶液(95%乙醇)分别用两个相同的比色皿盛装后,放置在仪器的比
色架上,按仪器使用方法进行光谱扫描,得到吸收曲线图。
2.吸收系数的测定利用上述溶液,在274nm波长处测定其吸光度,计算百分吸收系数。
实验三、分光光度法测定槐花中总黄酮的含量
一、实验目的
1.掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法
2.巩固紫外-可见分光光度计的操作方法
二、实验原理
黄酮类化合物分子结构中多含有羰基和羟基等结构,这些结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐
等生成有色配合物。
铝盐比色法是指用三氯化铝或硝酸铝、亚
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