色谱法分离原理-教案.doc

第十四章色谱法别离原理

教学内容

1.色谱别离的根本原理和根本概念

2.色谱别离的理论根底

3.色谱定性和定量分析的方法

重点与难点

1.塔板理论，包括流出曲线方程、理论塔板数(n)及有效理论塔板数(neff)和塔板高度(H)及有效塔板高度(Heff)的计算

2.速率理论方程

3.别离度和根本别离方程

三．教学要求

1.熟练掌握色谱别离方法的原理

2.掌握色谱流出曲线〔色谱峰〕所代表的各种技术参数的准确含义

3.能够利用塔板理论和速率理论方程判断影响色谱别离各种实验因素

4.学会各种定性和定量的分析方法

四．学时安排4学时

概述

色谱法早在1903年由俄国植物学家茨维特别离植物色素时采用。他在研究植物叶的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后参加石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相别离形成各种不同颜色的谱带。这种方法因此得名为色谱法。以后此法逐渐应用于无色物质的别离，“色谱”二字虽已失去原来的含义.但仍被人们沿用至今。

在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相〔固体或液体〕称为固定相；自上而下运动的一相〔一般是气体或液体〕称为流动相；装有固定相的管子〔玻璃管或不锈钢管〕称为色谱柱。当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。

从不同角度，可将色谱法分类如下：

1.按两相状态分类

气体为流动相的色谱称为气相色谱〔GC〕

根据固定相是固体吸附剂还是固定液〔附着在惰性载体上的

一薄层有机化合物液体〕，又可分为气固色谱〔GSC〕和气液色谱〔GLC〕。液体为流动相的色谱称液相色谱〔LC〕

同理液相色谱亦可分为液固色谱〔LSC〕和液液色谱〔LLC〕。

超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色谱〔SFC〕。随着色谱

工作的开展，通过化学反响将固定液键合到载体外表，这种化学键

合固定相的色谱又称化学键合相色谱〔CBPC〕.

2.按别离机理分类

利用组分在吸附剂〔固定相〕上的吸附能力强弱不同而得以别离的方法，称为吸附色谱法。

利用组分在固定液〔固定相〕中溶解度不同而到达别离的方法称为分配色谱法。

利用组分在离子交换剂〔固定相〕上的亲和力大小不同而到达别离的方法，称为离子交换色谱法。

利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而到达别离的方法，称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法。

最近，又有一种新别离技术，利用不同组分与固定相〔固定化分子〕的高专属性亲和力进行别离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的别离。

3.按固定相的外型分类

固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱。

固定相呈平板状的色谱，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。

4.按照展开程序分类

按照展开程序的不同，可将色谱法分为洗脱法、顶替法、和

迎头法。洗脱法也称冲洗法。工作时，首先将样品加到色谱柱头上，

然后用吸附或溶解能力比试样组分弱得多的气体或液体作冲洗剂。

由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力不同.被冲洗剂带出的先

后次序也不同，从而使组分彼此别离。

这种方法能使样品的各组分获得良好的别离，色谱峰清晰。此外，除去冲洗剂后，可获得纯度较高的物质。目前，这种方法是色谱法中最常用的一种方法。

顶替法是将样品加到色谱柱头后，在惰性流动相中参加对固定相的吸附或溶解能力比所有试样组分强的物质为顶替剂〔或直接用顶替剂作流动相〕，通过色谱柱，将各组分按吸附或溶解能力的强弱顺序，依次顶替出固定相。很明显，吸附或溶解能力最弱的组分最先流出，最强的最后流出。

此法适于制备纯物质或浓缩别离某一组分；其缺点是经一次使用后，柱子就被样品或顶替剂饱和，必须更换柱子或除去被柱子吸附的物质后，才能再使用。

迎头法是将试样混合物连续通过色谱柱，吸附或溶解能力最弱的组分首先一纯物质的状态流出，其次那么以第一组分和吸附或溶解能力较弱的第二组分混合物，以此类推。该法在别离多组分混合物时，除第一组分外，其余均非纯态，因此仅适用于从含有微量杂质的混合物中切割出一个高纯组分〔组分A〕，而不适用于对混合物进行别离。

第二节色谱流出曲线及有关术语

〔一〕色谱流出曲线和色谱峰

由检测器输出的电信号强度对时间作图，所得曲线称为色谱

流出曲线。曲线上突起局部就是色谱峰。

如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线〔气固吸附色谱〕

或分配等温线〔气液分配