天然和重组蛋白结构测定课件.pptxVIP

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天然和重组蛋白结构测定;第一节X-射线晶体结构分析

;第一节X-射线晶体结构分析(续1);第一节X-射线晶体结构分析(续2);第一节X-射线晶体结构分析(续3);第一节X-射线晶体结构分析(续4);第一节X-射线晶体结构分析(续5);X-ray研究蛋白質的3-D結構;第二节核磁共振波谱的溶液结构解析;第二节核磁共振波谱的溶液结构解析(续1);第二节核磁共振波谱的溶液结构解析(续2);測量方法;Lauemethod;Rotating-crystalmethod;Powdermethod;布拉格繞射圖;核磁共振(NMR)波谱学原理及其应用;第一章绪言;1965年提出快速FT变换方法。

1966年R.R.Ernst等实现了FT-NMR实验。将信号采集由频率域→时域,使信号累加变得容易,大大提高NMR灵敏度,13C核的测量成为可能,这是一次革命。

利用不同的脉冲组合来加工核自旋体系的信息,获得特定的分子结构信息:驰豫时间,共振峰的分类(DEPT,1NEPT)

1971年J.J.Jeener首次引入二维谱的概念。

1974年R.R.Ernst小组首次成功地实现二维实验,NMR进入全新时代。;上世纪80年代是NMR迅速发展的十年。

1991年R.R.Ernst本人获诺贝尔化学奖。

;;;NMR发展的里程碑;;Radiation;波实际上是由二个正交(互相垂直)的彼此完全相同的波组成的。其中一个描述辐射的电场矢量(E),在一个平面内振荡,而另一个波描述磁场矢量(B),在垂直于电场的平面内振荡。

波可用二个独立的量,波长(?)和最大振幅(图中的E0和B0)来表征。电磁辐射以固定的速度传播,可用频率?来描述波,频率是相邻两个波之间的距离t0的倒数。

t0的单位是秒,?的单位赫兹(Hz)

;在t0时间内,电磁波传播的距离为???。

C=??t0

对某一特定的波,其波长和频率不是二个互为独立的量,而是互为反比例的关系。高频辐射具有短的波长,而低频辐射则具有长的波长。

;电磁波除了波动性外,还表现出粒子的某些行为。光子最重要的类粒子性质是它的能量(E)。每一个光子具有分立的能量,它与频率成正比关系。这种关系可表示如下:

E=h?

式中h-普朗克常数,其值为6.63x10-27尔格.秒

对NMR的目的来说,我们特别感兴趣的是射频辐射(rf),其频率范围与收音机和电视机的接收频率相同。通常采用频率为200-750MHz的波段。表中能量标尺的低能端,恰好是我们实现NMR实验所需要的能量。

;第二章原子核的磁性;2.1.1原子核的组成;2.1.2核自旋;;原子ZX中I与Z和m的关系;核自旋为零的核,其I=0,因此不能用NMR来检测。;2.1.3核自旋的多重度;核;P;核;2.1.5在静磁场中原子核的行为;PZ=m?

m?磁量子数,或称方向量子数

取m=I,I-1,...I中任何一个数值,共有(2I+1)个不同的m值。

对13C,1H核I=?,mZ=+?,mZ=-?;

对2H,14N核I=1,mZ=+1,-1。

?方向量子化

?Z=m??

;;2.1.6核在磁场中的能量;;;2.17能级的布居数(population);例:温度25℃(298K),磁场强度为5.87T时,求出1H核在上下能级各占多少?

解:利用方程式

只有两个自旋态N(m=-?)=1-N(m=+?)

故N(m=-?)=0.49999和N(m=+?)=0.50001

;1H的两个自旋态布居数相差极其微小的,相差的数量级为20ppm,对其它原子核,相差更小。与其它技术,如IR和UV光谱相比,是造成NMR灵敏度相对较低的原因。;;第三章NMR实验的基本原理;当频率?1满足??1=?E时,能级间发生跃迁,

?E=E-?-E+?=???B0+???B0=??B0

??1=??B0?L=?1=B0

即当射频场的频率与核磁场中的拉摩尔进动频率匹配时,这时发生共振。低能级的磁性核吸收一个辐射量子跃迁至较高能级;同时,位于高能级的核释放出能量回到低能级。每次跃迁都伴随着自旋方向的变化。

;跃迁选择规律:?m=±1

称为单量子跃迁,即在相邻的两个能级之间跃迁。;1H和13C在不同静磁场中的共振频率;3.2脉冲傅立叶变换NMR方法;一个有一定宽度(tp)的射频方形脉冲的频谱中包含全部频率成分。但是各频率分量的幅度不均匀,射频频率f1最强,然后在f1两边幅度逐

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