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基因工程载体;在基因工程操作中，把能携带外源DNA进入受体细胞的DNA分子叫载体。;（1）在宿主细胞内能独立复制。
（2）有选择性标记。;3.载体的种类;第一节质粒载体;大肠杆菌的质粒;（1）分子小：;（4）质粒的空间构型：;③线形DNA（linear，lDNA）;（5）质粒空间构型与电泳速率;二、质粒的类型;除了带有自我复制所必需的遗传信息外还带有一套控制细菌配对和质粒接合转移的基因。;大肠杆菌接合（conjunction）;2.非接合型质粒：;;带有控制大肠杆菌素（colicin）合成的基因。;三、质粒的复制类型;（1）分子量大，拷贝数低;;ColE1质粒的筛选标志是大肠杆菌素E1（colicinE1）。;ColE1;（1）具有复制起点（ORI）;;氨苄青霉素抗性（Ampr）
卡那霉素抗性（Kanr）
四环素抗性（Tetr）
链霉素抗性（Strr）
氯霉素抗性（Cmlr）;常用抗菌素的抗性工作原理;ii）氯霉素（chloramphenicol，Cml）;a）杀菌原理;iv）链霉素（Streptomycin，Str）;v）四环素（Tetracycline，Tet）;;;②遗传标记;;当带有抗菌素抗性基因的载体进入受体菌后，受体菌才能生长。;4.人工构建的质粒载体的类型;（2）低拷贝数的质粒载体;（3）失控的质粒载体;（4）插入失活型质粒载体;（5）正选择的质粒载体;（6）表达型质粒载体;复制起始点ORI、
选择标记、
多克隆位点MCS;;五、经典的大肠杆菌质粒载体;6个克隆位点：
EcoRI、XhoI、PvuI、HindIII、BamHI、SalI
主要使用EcoRI。;;2.ColE1;;EcoRI位于E1内部，插入外源DNA会导致E1失活，使受体菌不能合成E1（ColE1-），但仍然表现出对E1免疫型（ImmE1+）。;;;pSP2124质粒的Ampr基因;;;（5）pBR322的优点;外源基因?BamHI;氯霉素扩增之后，每个细胞可达1000~3000copy;保留了转移蛋白（mob）的作用位点。;①删除mob识别位点;pBR325：;4.pUC系列;①复制起点;
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