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酶分子修饰

通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的过程称为酶分子修饰。

酶分子是具有完整的化学结构和空间结构的生物大分子。酶分子的结构决定了酶的性质和功能。正是酶分子的完整空间结构赋予酶分子以生物催化功能，使酶具有催化效率高、专一性强和作用条件温和等特点。但是在另一方面，也是酶的分子结构使酶具有稳定性较差、活性不够高和可能具有抗原性等弱点。

当酶分子的结构发生改变时，将会引起酶的性质和功能的改变。;第一节金属离子置换修饰

把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的功能和特性发生改变的修饰方法称为金属离子修饰。

通过金属离子置换修饰，可以了解各种金属离子在酶催化过程中的作用，有利于阐明酶的催化作用机制，并有可能提高酶活力，增加酶的稳定性。

;有些酶中含有金属离子，而且往往是酶活性中心的组成部分，对酶催化功能的发挥有重要作用。例如，α-淀粉酶中的钙离子（Ca2+）、谷氨酸脱氢酶中的锌离子（Zn2+）、过氧化氢酶中的铁离子（Fe2+）等。

金属离子置换修饰只适用于那些在分子结构中本来含有金属离子的酶。用于金属离子置换修饰的金属离子，一般都是二价金属离子，如Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+、Co2+、Cu2+、Fe2+等。

;第二节大分子结合修饰

若采用的修饰剂是水溶性大分子，则称为大分子结合修饰。通过分子结合修饰，可以提高酶活力，增加酶的稳定性，降低或消除酶蛋白的抗原性等。

（1）水溶性分子与酶蛋白的侧链基团通过共价键结合后，可使酶的空间构象发生改变，使酶活性中心更有利于与底物结合，并形成准确的催化部位，从而使酶活力提高。例如，每分子核糖核酸酶与6.5分子的右旋糖酐结合，可以使酶活力提高到原有酶活力的2.25倍；每分子胰凝乳蛋白酶与11分子右旋糖酐结合，酶活力达到原有酶活力的5.1倍等。

;（2）通过修饰可以增加酶的稳定性。酶的稳定性可以用酶的半衰期表示。酶的半衰期是指酶的活力降低到原来活力的一半时所经过的时间。酶的半衰期长，则说明酶的稳定性好；半衰期短，则稳定性差。例如，超氧化物歧化酶（SOD）???人体血浆中的半衰期仅为6min，经过分子结合修饰，其半衰期可以明显延长。

;（3）通过修饰降低或消除酶蛋白的抗原性。酶大多数是从微生物、植物或动物中获得的，对人体来说是一种外源蛋白质。当酶蛋白非经口（注射等）进入人体后，往往会成为一种抗原，刺激体内产生抗体。产生的抗体可与作为抗原的酶特异地结合，使酶失去其催化功能。抗体与抗原的特异结合是由它们之间特定的分子结构所引起的。通过酶分子修饰，使酶蛋白的结构发生改变，可以大大降低或消除酶的抗原性，从而保持酶的催化功能。例如，精氨酸酶经聚乙二醇结合修饰后，其抗原性显著降低；L-天冬酰胺酶经聚乙二醇结合修饰后，抗原性完全消除。

;第三节肽链有限水解修饰

酶分子的主链包括肽链和核苷酸链，主链被切断后，可能出现下列3种情况。

①若主链的断裂引起酶活性中心的破坏，酶将丧失其催化功能。这种修饰主要用于探测酶活性中心的位置。

②若主链断裂后，仍然可以维持酶活性中心的空间构象，则酶的催化功能可以保持不变或损失不多，但是其抗原性等特性将发生改变。有些酶蛋白具有抗原性，除了酶分子的结构特点以外，还由于酶是生物大分子。酶蛋白的抗原性与其分子大小有关，大分子的外源蛋白往往有较强的抗原性，而小分子的蛋白质或肽段的抗原性较低或无抗原性。若采用适当的方法使酶分子的肽链在特定的位点断裂，其相对分子质量减少，就可以在基本保持酶活力的同时使酶的抗原性降低或消失，这种修饰方法又称为肽链有限水解修饰。例如，木瓜蛋白酶用亮氨酸氨肽酶进行有限水解，除去其肽链的三分之二，该酶的活力基本保持，其抗原性却大大降低；又如，酵母的烯醇化酶经肽链有限水解，除去由150个氨基酸残基组成的肽段后，酶活力仍然可以保持，抗原性却显著降低。

;③若主链的断裂有利于酶活性中心的形成，则可使酶分子显示其催化功能或使酶活力提高。例如，胰蛋白酶原用胰蛋白酶进行修饰，除去一个六肽，从而显示胰蛋白酶的催化功能；天冬氨酸酶通过胰蛋白酶修饰，从其羧基末端切除10多个氨基酸残基的肽段，可以使天冬氨酸酶的活力提高4~5倍；线性间隔序列LIVS的5′-末端切除19个核苷酸残基后，形成多功能核酸类酶L-19IVS。

;第四节酶蛋白的侧链基团修饰

采用一定的方法（一般为化学法）使酶蛋白的侧链基团发生改变，从而改变酶分子的特性和功能的修饰方法称为侧链基团修饰。

酶蛋白的侧链基团修饰可以用于研究各种基团在酶分子中的作用及其对酶的结构、特性和功能的影响，在研究酶的活性中心中的必需基团时经常采用。如果某基团修饰后不引起酶活力的变化，则可以认为此基团是非必需基团；如果某基团修饰后使酶活力显著降低或丧失，