植生实验 3硝酸还原酶.pptVIP

硝酸还原酶将N03-还原为N02-，产生的N02-可以从组织内渗透到外界溶液中，并积累在溶液中，测定反应液中的N02-含量的多少，就表示硝酸还原酶活性的大小。N02-含量的测定用磺胺比色法。在酸性溶液中磺胺与N02-形成重氮盐，重氮盐再与α-萘胺偶联形成紫红色的偶氮染料，这种偶氮染料在520nm处有最大吸收峰，因此选用波长520nm分光光度法进行测定。根据Lambert-Beer定律：物质对光的吸收，吸收的光量与物质的浓度、溶液的厚度成比例关系，用公式表示为A=KLCK为吸收系数，表示物质对光的吸收特性，为定值L为溶液厚度，比色杯直径为1cmKL为固定值，C溶液浓度越大，则吸光度越大器材与试剂油菜叶片、小白菜叶片、UV-1100型紫外/可见分光光度计、20毫升针筒、打孔器、恒温箱、天平、比色皿、三角瓶、移液枪、擦镜纸、吸水纸0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液、O.2MKNO3溶液、磺胺试剂、α-萘胺试剂、超纯水方法与步骤1、用直径1cm的打孔器打出油菜叶圆片100片，各投50片(先称重)至溶液(1)磷酸缓冲液5ml+蒸馏水5ml(2)磷酸缓冲液5ml+KNO3溶液5ml分别将溶液(1)(2)倒入20毫升针筒内，用针筒抽气使叶圆片中的空气抽去直至叶圆片沉于溶液中，