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化肥与绿肥配施对土壤微生物多样性的影响

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闫庚戌范丙全

摘要：通过对化肥与油菜绿肥配施的几种不同方式所引起的微生物区系变化进行研究，为探索化肥与绿肥的最佳配施方案，建立保护土壤的农田管理规程提供理论依据。土壤样品取自进行了6a化肥绿肥配合的定位试验田，共进行5个施肥方案，利用Biolog技术，对施肥后土壤的微生物数量、微生物碳、无机碳、麦角固醇进行测定分析，从而得出土壤中不同菌群数量及活性的结论。发现：低量化肥与绿肥配施有利于增加土壤有机碳、微生物碳、麦角固醇以及微生物的数量;不施肥能够提高土壤革兰氏阴性（GN）细菌和革兰氏阳性（GP）细菌的多样性，有机和无机肥料都能引起土壤GN、GP细菌多样性的下降，合理的化肥与绿肥配施，能够减缓土壤GN细菌多样性下降速度，油菜用作绿肥不利于GP细菌多样性的培育;不施肥有利于土壤SFN真菌多样性的保持，施肥会使土壤SFN真菌多样性下降，单施化肥会导致SFP真菌多样性的下降，绿肥和中量化肥配施能够提高SFP真菌的多样性。

关键词：土壤;施肥;微生物多样性

：S-3

：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20191115001

基金项目：国家自然科学基金（项目编号;国家863项目（项目编号：2003AA241150）;所长基金课题“农业微生物学的宏观研究”（项目编号：2002）

*为本文通讯作者

目前，我国每年的化肥施用量在6000万t左右，中国能以占世界7%的耕地养活占世界22%的人口，可以说化肥起到举足轻重的作用[1]。然而随着化肥用量的不断增加和不合理施用，由此引发的土壤质量问题也日益凸显[2，3]。长期大量施用化肥会对土壤理化性状和生物学活性等产生恶劣影响，尤其会导致土壤微生物生物量和多样性的下降[4]。

土壤微生物可以促进土壤有机质的分解和养分转化，是作物生长氮、磷、钾、镁的重要来源[5，6]。土壤微生物受农业田间管理的影响较大，作物轮作、施肥方式和秸秆还田等都会影响土壤微生物特性[7-10]。

近年来，随着有机肥在农业生产中的大量施用，在一定程度上减缓了化肥对土壤质量的损害。然而如果将有机肥取代化肥，又远远不能满足作物的养分需求[11]。有研究指出，将化肥与有机肥配合使用，可以协调养分供应，满足作物需求，同时减少化肥对土壤微生物活性影响[12，13]。

绿肥是最重要的有机肥之一，我国是绿肥种植最早、种植面积最大的国家[14]。大量的科学研究表明，绿肥施用可以改善土壤理化性质，提高土壤微生物多样性[15]。本文利用Biolog技术，对化肥与油菜绿肥配施的5种方案引起微生物多样性的影响进行研究，为探讨绿肥与化肥配施的最佳方案提供理论依据。

1材料与方法

1.1土壤样品与试验设计

1.1.1土壤样品

试验时间起始于2002年9月，地址在河北省农科院院内。首先进行6a化肥绿肥配合的定位试验。2008年5月取土样，每小区取10钻土样，混匀风干备用。土壤理化性质：全氮0.093%，有机质18.3g/kg，速效磷21.1mg/kg，碱解氮62.8mg/kg，速效钾130mg/kg。质地为壤质褐土。

1.1.2试验设计

[JP2]试验为随机区组设计，小区面积3m2。共设5个处理：不施肥CK;单施化肥INORG-F：N180kg/hm2[JP2]、[JP3]P2O5120kg/hm2、K2O105kg/hm2;高量化肥与绿肥配施GM+FH：N180kg/hm2、P2O5105kg/hm2、K2O105kg/hm2+油菜绿肥22500kg/hm2;低量化肥与绿肥配施GM+FL：N111kg/hm2、P2O581kg/hm2、K2O70.5kg/hm2+油菜绿肥22500kg/hm2;中量化肥与绿肥配施GM+FM：N171kg/hm2、P2O5141kg/hm2、K2O70.5kg/hm2+油菜绿肥22500kg/hm2。3次重复。试验作物为小麦、玉米，播种方式一年两作。小麦播种前翻压绿肥。[JP]

1.2样品处理及分析

土壤样品风干后过2mm筛。其中一部分用于微生物多样性分析，另一部分用于微生物碳、麦角固醇分析。

土壤微生物数量采用平板计数法分析。从各土壤样品中称30g，置于50mL离心管中并加水調至80%田间持水量，保持23℃培育2周。然后将其称取1g稀释至浓度10-4和10-6，分别测定真菌、细菌数量及多样性;土壤全碳测定采用自动燃炉技术测定，无机碳测定用HCL溶解、气相色谱，全碳减去无机碳即为有机碳含量;微生物-C测定采用熏蒸提取法[16];麦角固醇按[17]方法分析。

1.3BIOLOG微型培养板接种

共4种培养板，分别为Biolog-GN革兰氏阴性细菌、Biolog-GP革兰氏阳性细