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实验九细菌的生化鉴定

一、实验目的

1、了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反

应的测定方法；

2、掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V.P的原理、方

法及相应培养基的制备方法。

3、了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意

义；

4、掌握以上实验的用途。

二、实验原理

各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有

的单细胞原核生物特性，这种差异就表现得更加明显。不同细菌

具有不同的酶系统，故不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白

类物质的能力不同，它们对物质的代谢谱和分解产物也就不同，

细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。用生理生化试验的方法

检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的

种属，称之为细菌的生理生化反应，其在菌株的分类鉴定中具有

主要意义。

1、糖发酵实验

不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的

能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的

产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加

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入溟甲酚紫［PHS.2（黄色）一6.8（紫色）]，当发酵产酸时，

可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管

中有无气泡来证明。发酵后产生的有机酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴

甲酚紫变色范围pH5.2~6.8,pH5.2黄色，pH6.8紫色）；发酵后产

生的气体：甲烷、氢、二氧化碳等（杜氏小管内有气泡，产气漂浮）。

2、M.R.及V.P实验

很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分

解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下，

这时若加甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色范围是pH4.4

（红色）-pH6.2（黄色）。若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产

生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH仍

在6.2以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。甲基红试验是

用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代

谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘

黄色变为红色。VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性

或中性末端产物的能力，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰

甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。

二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。

3、吲哚实验

吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分

解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛

结合，形成红色的玫瑰吲哚。

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4、淀粉水解实验

微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产

生的胞外酶将大分子物质分解成小分子物质才能被微生物吸收利用。

胞外酶主要是水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小的化合物，使

其能被运输到细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单

糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。

这些过程可以通过观察细菌菌