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考马斯亮蓝染色法显示细胞骨架--第1页
细胞生物学实验
考马斯亮蓝染色法显示细胞骨架
一、实验目的
a)掌握细胞骨架的特点及在细胞中的基本位置。
b)掌握考马斯亮蓝染色法观察细胞骨架。
c)了解各种试剂在细胞骨架染色观察中的作用。
二、实验原理
细胞骨架（cytoskeleton）是细胞内以蛋白纤维为主要成分的网络结构。
广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质，
狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微管（microtubule,MT）、微丝
（microfilament,MF）和中间纤维（intermediatedfilament,IF）。
微管是细胞内由微管蛋白形成的直径约20~26nm的长度不一的小管。分
布在核周围，呈放射状向胞质四周扩散，主要确定膜性细胞器的位置和作为
膜泡运输的导管。微管蛋白有α和β两种。αβ异二聚体沿纵向聚合成
丝，原丝成环状排列形成微管的壁。微管不稳定，对低温（冷冻）、高压等
物理因素及秋水仙素（微管断裂剂）等化学因素敏感。紫杉醇可以和微管蛋
白多聚体结合，抑制微管解聚。
微丝在真核细胞内主要由肌动蛋白（actin）组成的直径为5～7nm的骨
架纤丝。主要分布在细胞质膜的内侧，作用是确定细胞表面特征、并与细胞
运动、收缩、内吞等功能有关。脊椎动物肌动蛋白分为α、β和γ三种类型，
不同种类细胞中肌动蛋白组成不同。肌动蛋白单体为球形，依次连接成链，
两串肌动蛋白链互相缠绕扭曲成一股微丝。细胞松弛素B为微丝断裂剂。
中间纤维是直径介于微丝和微管之间（7~11nm）、由多种不同蛋白组成
的细胞骨架成分。在细胞中围绕着细胞核分布，成束成网，并扩展到细胞质
膜，与质膜骨架相连结。主要起机械支撑和加固作用。中间纤维在不同细胞
中的蛋白组成不同，可用于鉴定肿瘤细胞来源。
细胞骨架在细胞形态维持、细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递、细
胞分裂等一系列方面均有重要作用，所以对于细胞骨架的研究是近代细胞生
物学最活跃的研究领域之一。由于细胞骨架易受各种理化因素的影响而发生
形态变化，细胞骨架也常作为目标研究环境温度、放射线、重金属、致癌剂
及抗癌药物等对细胞的影响。
显示细胞骨架的常用方法有两种：考马斯亮蓝染色法和免疫荧光染色法。考
马斯亮蓝染色法具有简单易行的特点，但不能区分骨架蛋白的组成，仅能用
于骨架形态及完整性研究；免疫荧光染色法可特异显示骨架蛋白，具有更普
遍的应用意义。
用去垢剂Triton-X-100处理细胞，可以溶解膜脂，并与大部分非骨架蛋白
疏水区结合而将其溶解掉，剩下细胞骨架系统的蛋白不被溶解掉，然后用蛋
白染料考马斯亮蓝染色即可显示骨架结构。
三、实验仪器及试剂
a)实验材料
洋葱鳞茎内表皮
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细胞生物学实验
b)实验试剂
i.M缓冲液，配方：
1.咪唑50mmol/L，2.KCl50mmol/L
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