《多聚酶链式反应扩增DNA片段（第1课时）》公开课课件.pptxVIP

刘伟锐河北师大附中

多聚酶链式反应扩增DNA片段

新闻报道或克隆复活猛犸象四万年前猛犸象DNA将被提取

微量DNA大量DNA扩增PCR技术新闻报道或克隆复活猛犸象四万年前猛犸象DNA将被提取

PCR原理

细胞内DNA分子复制的过程温故知新

细胞内DNA分子的复制需要的基本条件模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶解旋酶ATP

引物探究新知小资料：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上

细胞内DNA分子的复制引物引物的碱基序列有什么特点？与DNA母链的一段碱基序列互补配对此时合成的子链与上图中合成的子链有什么不同？子链开始延伸的位置决定于:引物与模板链结合的位置

甲乙判断小资料：DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸以下甲乙两图，哪个能正确表示DNA子链延伸的方向？细胞内DNA分子的复制引物

123455’3’细胞内DNA分子的复制引物

乙判断以下甲乙两图，哪个能正确表示DNA子链延伸的方向？甲3’5’3’5’总是从子链的5’端向3’端延伸DNA子链的合成方向：细胞内DNA分子的复制引物

3’5’3’5’DNA子链合成过程中引物的特点小结引物决定子链开始延伸的位置引导DNA子链的合成与DNA母链的一段碱基序列互补配对

细胞内DNA分子的复制需要的基本条件模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶解旋酶ATP引物

若将细胞内DNA分子的复制需要的各种物质放置在合适的容器内进行反应，并加以控制合适的条件，你觉得实验会成功吗？知识迁移

PCR物质准备及条件控制

微量离心管PCR反应场所

PCR物质准备及条件控制模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶解旋酶ATP引物微量离心管中加入这些物质是否可行？

模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶解旋酶ATP引物PCR物质准备及条件控制80~100℃50℃左右

模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶解旋酶ATP引物PCR物质准备及条件控制高温该反应装置一直处于高温状态是否可行？调节温度

模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶解旋酶ATP引物还有需要改动的地方吗？PCR物质准备及条件控制

该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活。由于发现于水生栖热菌（Thermusaquaticus）内，故命名为TaqDNA聚合酶。耐高温的TaqDNA聚合酶PCR物质准备及条件控制

模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶ATP引物TaqDNA聚合酶PCR物质准备及条件控制

模板DNA4种脱氧核苷酸ATP引物TaqDNA聚合酶2种一定的缓冲溶液PCR物质准备及条件控制

自动调控温度PCR物质准备及条件控制实验过程中，温度需要调整几次？变性、复性、延伸分别需要不同的温度

在每次循环的时候，上一轮的产物都可以作为下一轮反应的模板若循环30次可以得到230个DNA片段PCR结果

实验中DNA含量的测定可以通过测量DNA含量来评价扩增的效果，DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA的含量有关。PCR结果

3’—GAT…CGTGCATCGTGACTG……GCTAACGGT…GCA—5’5’—CTA…GCACGTAGCACTGAC……CGATTGCCA…CGT—3’若下图为猛犸象的部分DNA序列，要扩增红色框内的一段DNA序列，尝试写出所设计的引物的碱基序列？学以致用

3’—GAT…CGTGCATCGTGACTG……GCTAACGGT…GCA—5’5’—CTA…GCACGTAGCACTGAC……CGATTGCCA…CGT—3’5’—GCACTGAC—3’3’—GCTAACGGT—5’引物设计的原则：碱基序列、引物长度若下图为猛犸象的部分DNA序列，要扩增红色框内的一段DNA序列，尝试写出所设计的引物的碱基序列？学以致用

3’—GAT…CGTGCATCGTGACTG……GCTAACGGT…GCA—5’5’—CTA…GCACGTAGCACTGAC……CGATTGCCA…CGT—3’5’—GCACTGACGCTAACGGT—5’—3’

3’—GAT…CGTCATCGTGACTG……GCTAACGGT…GCA—5’5’—GCACTGAC—3’5’—GCACTGAC—3’GCTAACGGT—5’3’—GCTAACGGT—5’3’—5’—GCACTGAC—3’DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列

模板DNA4种脱氧核苷酸TaqDNA聚合酶2种引物一定的缓冲溶液80~100℃50℃左右72℃左右若实验未出现预期结果，试分析可能的原因？综合应用

谢谢