苜蓿镰刀菌根腐病室内抗性鉴定技术.docxVIP

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苜蓿镰刀菌根腐病室内抗性鉴定技术规程

1范围

本文件规定了苜蓿抗镰刀菌根腐病的接种体制备、抗病性鉴定、病情调查和抗病性评价。本文件适用于室内评价苜蓿不同品种对镰刀菌根腐病的抗性水平。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB6141豆科草种子质量分级

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

苜蓿镰刀菌根腐病AlfalfaFusariumRootRot

由镰刀菌（Fusariumspp.）引起的土传性真菌病害，造成根和根颈部出现褐色病斑至腐烂凹陷，开裂或剥脱，中柱红褐色至暗褐色，植株萎蔫直至死亡。

3.2

接种体Inoculum

在实验室条件下培养的用于人工接种的病原菌繁殖体或营养体。

4接种体制备

4,1供试菌种

选取内蒙古苜蓿种植区发病株上分离获得的具有中等致病力的根腐病优势菌株—锐顶镰刀菌（Fusariumacuminatum）。

4.2培养基制备

马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）：马铃薯200g，洗净去皮切成1cm～2cm的小块，加水煮沸20min，纱布过滤，加入葡萄糖20g和琼脂15g，待完全熔化后，用水定容至1000mL，搅拌均匀，高压灭菌（121℃,20min）。

麦麸培养基：将40mL蒸馏水加入60g麦麸中拌匀，装入三角瓶中，高压灭菌（121℃,30min）。

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4.3接种体繁殖

在无菌条件下将接种菌株转接于PDA平板培养基上，25℃恒温培养3d～5d，自菌落边缘打取直径

6mm菌饼3～5块，接种于灭菌的麦麸培养基上，摇匀后置于恒温培养箱25℃培养7d。4,4接种悬浮液制备

用200mL～300mL无菌水将麦麸进行淘洗，用四层纱布过滤，获得孢子悬浮母液，配制成孢子量为5×106个/mL的悬浮液用于接种。

5抗病性鉴定

5.1种子质量

鉴定品种的种子质量应符合GB6141中苜蓿一级种标准。5.2育苗

将种子在3%次氯酸钠溶液中浸泡2min，转至75%乙醇溶液中消毒30s，无菌水冲洗5遍，播种于装有灭菌营养土的穴盘中。置于温度24℃~26℃,空气相对湿度30%～40%的温室条件下，待苜蓿幼苗生长至3～4片复叶时接种。

5.3接种

5.3.1接种方法

采用蘸根接种法进行接种（详见参考文献1）。将幼苗从穴盘中取出，根系冲洗干净后完全浸泡于接种悬浮液中，30min后将幼苗重新移植于装有灭菌营养土的营养钵（高10cm，直径10cm）中，每钵5株，每个处理30株，重复三次。

5.3.2接种后管理

将营养钵置于24℃~26℃,光照10h～12h温室条件下生长，保持基质湿润。

5.3.3对照品种

选择高感苜蓿品种为对照材料。

6病情调查

6.1病情级别划分

病情级别划分见表1（引自参考文献2）。

表1苜蓿镰刀菌根腐病抗性室内鉴定病情级别的划分

病情级别

代表值

症状描述

1

0

健康无症状

2

1

根颈部出现少量黑褐色、较小斑点

3

2

根颈被黑褐病斑包围

3

表1苜蓿镰刀菌根腐病抗性室内鉴定病情级别的划分（续）

病情级别

代表值

症状描述

4

3

根颈缢缩变黑，出现枯叶

5

4

根颈大部分变黑变褐，大多数叶片干枯

6

5

根颈部全部腐烂，整株枯死

6.2调查方法

接种35d后，按病情级别调查并记录接种株发病情况，计算病情指数（DI）。

病情指数按公式（1）计算：

×100…………………

式中：

DI——病情指数；

S——各病情级别代表数值；n——各病情级别病株数；

N——调查总株数；

S——最高病情级别代表值。注：计算结果精确到小数点后两位。

7抗病性评价

7.1抗病性评价标准

依据病情指数（DI）的平均值评价其抗性水平，划分标准见表2（引自参考文献3）。表2苜蓿镰刀菌根腐病抗性评定标准

病情指数（DI）

抗病类型

DI=0

免疫（Immune，I）

0＜DI≤20

高抗（HighResistant，HR）

20＜DI≤40

中抗（Mid-Resistant，MR）

40＜DI≤60

中感（Mid-Susceptible，MS）

DI＞60

高感（HighSusceptible，HS）

7.2有效性判别

对照高感品种病情指数大于60（DI＞60），该批次根腐病抗性鉴定视为有效。