小鼠脾单个核细胞的分离.ppt

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小鼠脾单个核细胞的分离

——密度梯度离心法;免疫细胞;免疫细胞分离方法:

根据不同免疫细胞表面标志:FACS;MACS

根据细胞理化性质:

1)根据细胞比重差异:

自然沉降法;密度梯度离心法;改变细胞密度法

2)根据细胞黏附特性:B细胞黏附于尼龙棉

3)根据细胞对渗透压变化的敏感度:红细胞对低渗敏感;*;本次实验亦根据颗粒沉降原理,将不同密度的小鼠脾脏细胞置于淋巴细胞分离液上水平式离心,使单个核细胞在其沉降运动中位于分离液界面上;达到分离小鼠单个核细胞的目的。已知小鼠淋巴细胞和单核细胞的密度约为1.088,而红细胞与粒细胞的密度均大于1.088。因此,用密度为1.088±0.001的淋巴细胞分离液通过密度梯度离心的方法,可从小鼠脾脏细胞中分离得到单个核细胞。;器材;试剂:

;稀释的脾细胞悬液;操作注意事项

;*;细胞数量明显增大时可适当加大稀释倍数。

充池时要一次完成,不能产生满溢、气泡或充池不足的现象。

大小方格内压线细胞的计数遵循数上不数下、数左不数右的原则,避免多数或漏数。

;*;实验结果记录与分析

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