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1
饲用燕麦草中性洗涤纤维瘤胃液体外
240小时降解率的测定
1范围
本文件规定了饲用燕麦草240h体外消化率测定方法的试剂和溶液、仪器和设备、样品、分析步骤和结果计算。
本文件适用于不同生长期、不同品种的饲用燕麦草中性洗涤纤维瘤胃液体体外240h降解率的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T3358.1统计学词汇及符号第1部分：一般统计术语与用于概率的术语GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备DB15/T1583牧草中aNDFom的测定
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
中性洗涤纤维neutraldetergentfiber
用中性洗涤剂去除饲草中的脂肪、淀粉、蛋白质和糖类等成分后，残留的不溶解物质的总称。
3.2
饲用燕麦草中性洗涤纤维体外降解率thedegradabilityofneutraldetergentfiberofoat
invitro
瘤胃液体外降解的饲用燕麦草中中性洗涤纤维含量占饲用燕麦草原样中中性洗涤纤维含量的百分比。
4试剂和溶液
4,1试剂和溶液
4.1.1如无特别说明，本方法所用试剂均为分析纯，所用水一律指GB/T6682中三级水。
2
4.1.2丙酮（CH3COCH3）。
4.1.3磷酸氢二钾（KH2PO4）。
4.1.4七水硫酸镁（MgSO4·7H2O）。
4.1.5氯化钠（NaCl）。
4.1.6二水氯化钙（CaCl2·2H2O）。
4.1.7尿素（CO(NH2)2）。
4.1.8碳酸钠（Na2CO3）。
4.1.9九水硫化钠（Na2S·9H2O）。
4.1.10乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2Na2O8）。
4.1.11四硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）。
4.1.12十二烷基硫酸钠（C12H25NaSO4）。
4.1.13乙二醇乙醚（C4H10O2）。
4.1.14无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）。4.2试剂配制
4.2.1缓冲液A的配制
缓冲液A的配制参见附录A。4.2.2缓冲液B的配制
缓冲液B的配制参见附录B。
4.2.33%十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液配制
称取18.60g乙二胺四乙酸二钠和6.80g四硼酸钠加入到100mL烧杯中，加少量水加热溶解后，再加入30.00g十二烷基硫酸钠和20mL乙二醇乙醚。称取4.65g无水磷酸氢二钠，置于另一烧杯中，加少量水，微微加热溶解后倒入第一个烧杯中，稀释至1000mL。
5仪器和设备
5.1羊用瘤胃液取样器（长30cm，内径12.70mm，PPR管）。5.2分析天平（分度值0.0001g）。
5.3烘干箱（室温至300℃)。
5.4磁力搅拌器（转速为100r/min～1400r/min）。
5.5纤维袋（ANKOMF57，25μm孔隙）。
5.6体外模拟培养箱（室温至45℃)。
5.7全自动纤维分析仪（室温至100℃)。
6中性洗涤纤维瘤胃液体外240h降解率的测定程序见图1。
3
样品的采集及制备（见7）
瘤胃液的制备（见8.1）
消化（见8.2.1）
洗涤（见8.2.2）
干燥（见8.2.3）
中性洗涤纤维含量的测定（见8.3）
↓
结果计算（见9）
图1中性洗涤纤维瘤胃液体外240h降解率的测定程序
7样品
7.1取样
按GB/T14699.1进行采样。7.2制备
样品根据GB/T20195制备，置于烘箱内于65℃烘干，研磨，过1mm筛后取筛下物。
8分析步骤
8.1瘤胃液的制备
在晨饲前经瘤胃瘘管利用瘤胃液取样器采集供试羊（不少于3只）的瘤胃液，直接转入预热至39℃的保温容器中，混合均匀后经4层纱布过滤，滤液持续通入CO2气体，然后量取400mL瘤胃上清液于39℃保温容器备用。
8.2体外消化步骤
8.2.1消化
4
称取0.5000g样品放置于纤维袋中，封口后平铺放置于体外模拟培养箱中消化罐的分隔板两侧。取两个容器分别加入266mL缓冲液B和1330mL缓冲液A，于39℃条件下调节其pH达到6
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