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基于高剪切分散乳化技术的黄芪中黄酮类化合物提取方法及动力学研究

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基于高剪切分散乳化技术的黄芪中黄酮类化合物提取方法及动力学研究

1引言

天然产物样品的前处理过程是建立其色谱分析方法的关键步骤。目前常用的样品前处理方法有回流提取法、索氏提取法、超声提取法、加压流体萃取法、微波辅助提取法、超临界CO2流体萃取法等\[1\]，以及近年来发展起来的固相微萃取、高速逆流色谱和液相微萃取等\[2～4\]。样品制备正向高效、快速、无污染或低污染的方向发展。

高剪切分散乳化（Highsheardispersingemulsifier，HSDE）技术作为近年发展起来的一种均质化技术，已被应用到药物研究相关的诸多领域。如Ye等\[5\]用HSDE分散含伊曲康唑小球的固体制剂，以提高药物的溶解速率；Seo等\[6\]利用HSDE技术使乳糖化合物与聚乙二醇3000互相富聚，形成团聚物，并进而作为吸附剂使用；孙术国等\[7\]利用HSDE与微波辅助偶联提取鲜葛中葛根素，提取效率明显高于传统方法，并具有时间短、能耗小等优点，这为天然产物样品前处理方法的研究提供了极有价值的探索。

黄芪是豆科植物膜荚黄芪或蒙古黄芪的干燥根，具有抗菌、抗病毒、增强机体免疫力等药理学作用。研究表明，黄芪药理学作用的主要有效成分包括黄酮类、皂苷类、多糖类以及氨基酸类等\[8\]。其中，黄酮类化合物是其质量评价与控制的主要指标性成分，主要包括毛蕊异黄酮7OβD葡萄糖苷（Calycosin7OβDglucoside，CY）、毛蕊异黄酮（Calycosin，CL）、芒柄花素（Formononetin，FR）、芒柄花苷（Ononin,ON）等。

目前，对提取黄芪中黄酮类物质的样品前处理方法很多，如Qi等采用回流法提取黄芪中黄酮类成分\[8\]，Huang等采用超声提取\[9\]。这是两种中药材提取最常用的方法，但耗时较长，需要的溶剂量较大。Song等采用微波辅助提取，实验过程操作简便，耗时较短，提取效率高\[10\]。但微波提取有一定的局限性。Xiao等［11］用基质固相分散技术来对黄酮类化合物进行分离。此方法虽然对黄酮类化合物选择性较高，但实验的回收率较差，仅为83.0%，实验的RSD值则高达22.0%。冯祖飞等\[12\]以大孔吸附树脂技术为样品前处理方法，该方法虽具有较高的灵敏度和重复性，但前处理操作程序繁杂。

鉴于HSDE相对于传统提取方法所具有的显著优势，本研究以HSDE作为黄芪中黄酮类物质提取的前处理技术，以HPLCDAD作为检测手段，进行提取过程的动力学研究，并探讨其提取机理，建立了HSDE样品前处理技术平台，以期应用到其它中药材的前处理过程中。2实验部分

2.1仪器与试剂

KQ500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BT224S分析天平（德国Sartorius公司）；FlukoFA25高剪切分散乳化机（上海弗鲁克流体机械制造有限公司）；Agilent1200型高效液相色谱系统（G1311A二元泵，G1315DDAD检测器，ChemStation色谱工作站，（美国Agilent公司））；AT900柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；RODITECHNOLOGYSPRING超纯水系统（厦门瑞思捷科学仪器有限公司）。对照品毛蕊异黄酮7OβD葡萄糖苷Calycosin7OβDglucoside，CY）、芒柄花苷（Ononin,ON）购自上海同田生物技术有限公司（纯度＞98%，HPLCDetection）；对照品毛蕊异黄酮（Calycosin，CL）、芒柄花素（Formononetin，FR）等为本实验室分离所得，经13CNMR、1HNMR和MS结构鉴定，HPLC峰面积归一化法测定其纯度不低于98%。甲醇、甲酸（分析纯）；乙腈（色谱纯）。水为超纯水；黄芪饮片（市售，产自甘肃陇南），经粉碎机粉碎为黄芪粗粉，过分样筛（保证黄芪颗粒粒径≤200

SymbolmA@m），备用。

分析化学第40卷

第5期滑聚娜等：基于高剪切分散乳化技术的黄芪中黄酮类化合物

提取方法及动力学研究

2.2实验方法

2.2.1高速剪切分散乳化提取装置高速剪切分散乳化提取装置如图1所示。高剪切机工作原理见图2。由一对相互交错“配合”的定子和转子组合而成\[13\]。转子上有多把刀片,转子高速运转,速度可高达10000～22000r/min。转子高速运转时在底部产生