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细胞培养与细胞转染

目的

学习细胞培养的基本方法

掌握磷酸钙法转染细胞的原理及操作步骤

体外细胞培养技术

细胞培养（cellculture）：是指从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，

使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。

细胞分类：贴壁细胞和悬浮细胞

优点：离体条件下观察细胞生命活动规律，不受体内环境影响可人为改变条件，进一步观察

生理功能的改变。

原代培养（primaryculture）：

直接取材于有机体组织的细胞进行培养

传代培养（secondaryculture）：

把原代培养的细胞从培养瓶中取出进行培养

细胞体外培养所需的一般条件：

适宜的培养皿血清成分37℃5％CO2

95～100％湿度抗生素

细胞系（cellline）：

在细胞培养中产生了具有无限增殖能力的变种细胞，这种细胞可被无限的传代。

常见的细胞系：

NIH3T3细胞系：1963年取自小鼠胚胎细胞建立

Hela细胞系：1952年取自人宫颈癌细胞建立

细胞培养基本技术

培养用品的清洗和消毒

无菌操作

培养用液的配制

组织取材和分离

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细胞传代培养

培养用品的清洗和消毒

1.清洗：浸泡，刷洗，清洁液浸泡，冲洗

2包装

3培养用品的消毒灭菌

干热消毒

湿热消毒

紫外线消毒

过滤除菌消毒

消毒剂和抗生素

一次性用品

无菌操作

（一）清点培养物品和用具

（二）操作野消毒，紫外线灯30分

（三）洗手和着装

（四）培养过程中的操作

酒精灯的使用，物品的摆放

（五）操作后台面的清洁和复位

培养用液

水和平衡盐溶液

天然培养基

合成培养基

水和平衡盐溶液

超纯水和三蒸水，双蒸水只能用于清洗

平衡盐溶液：配制培养液，洗涤组织和细胞

Hanks,D-Hanks,PBS,HEPES等

天然培养基

血清，水解乳蛋白和胶原

血清：

小牛血清，胎牛血清，马血清，兔血清，人血清

热灭活处理：56度，30分，灭活补体

合成培养基

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DMEM:MEM基础上改良而成，用于生长快，附着性差的肿瘤细胞

RPMI1640：应用广泛，用于正常细胞和肿瘤细胞

HAMF12：单细胞的培养

TC199：较少应用

无血清培养基

大多数细胞的培养依赖天然培养基，如血清，但干扰实验稳定

HAMF12＋DMEM（1：1）混合，再加入其它成分

其他常用液体

消化液：消化分散细胞