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微生物鉴定中常用的生理生化试验--第1页

一、实验目的

1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不

同的酶系统。

2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。

3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。

4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5.了解IMViC的原理。

二、实验原理

由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物

但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠

杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。具体的原理如下：

1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（枯草杆菌，大肠杆菌），培养两

天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，

淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。

2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有

些则不能。酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。

若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。

3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。

（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨

酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。本次不做该试

验。

（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被

分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶

液呈红色。

三、实验材料

1.菌种

大肠杆菌（Escherichiacoli），金黄色葡萄球(StaphyloccocusaureusRosenbach)，

铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（BacillussubtilisCohn），

产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。

2.培养基

固体油脂培养基，固体淀粉培养基，葡萄糖发酵培养基（5支，附德汉式小管），乳糖

发酵培养基（5支，附德汉式小管），蛋白胨水培养基。

3.溶液和试剂

革兰氏染色用卢戈氏碘液，甲基红指示剂，乙醚和吲哚试剂，无菌水。

4.仪器和其他用品

平板，试管，接种环，试管架，电子天平，称量纸，玻璃棒，三角瓶，烧杯，药匙，标

签纸，酒精灯，滴管。

四、实验步骤

1.淀粉水解实验

（1）培养基制备

将固体淀粉培养基熔化后冷却至50℃左右，无菌操作制成平板。

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（2）接种

用记号笔将平板划成四部分，分别将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿

假单胞菌在不同位置划线接种。在平板反面用记号笔写上菌名。

（3）培养

将上述已接种的平板倒置于37℃培养箱中培养48小时。

2.油脂水解实验

（1）培养基制备

将溶化的油脂培养基冷至50℃左右时，充分振荡，使油脂均匀分布，无菌操作倒入平

皿中，待凝。

（2）接种

用记号笔将平板划成四部分，分别将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄菌、铜绿假

单胞菌分别划十字线接种于平板的相对应部分