- 1、本文档共12页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
流式细胞仪荧光补偿--第1页
流式细胞仪荧光补偿
在流式细胞仪分析中用到的“荧光补偿”这个术语是指修正荧光渗漏的过程,
如从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。荧光补偿过程从原理上来说相对
简单,但实际上涉及许多精细、敏感的方面从而使在实践操作相当复杂。关键词:
荧光补偿细胞
在流式细胞仪分析中用到的“荧光补偿”这个术语是指修正荧光渗漏的过程,
如从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。荧光补偿过程从原理上来说相对
简单,但实际上涉及许多精细、敏感的方面从而使在实践操作相当复杂。非常不
幸,荧光补偿操作可能是在流式操作中的数据采集和分析等步骤中最少被了解和掌
握的内容,可能是因为在介绍它时经常要用到线性代数来计算,并且还要求了解
它的产生原理。然而,正确的荧光补偿对于许多流式分析来说绝对是至关重要的,
特别是对现常见的多抗原荧光表达强度分析。因为荧光补偿常被误解、误用并被
许多不正确的观念所包围,许多实验室的荧光补偿设置都不正确。本章的一个部分
将剖析有关补偿的一些疑惑问题。
图1显示在设置荧光补偿中常犯错误。本章将致力于从以下方面阐述流式细胞
仪荧光补偿问题:为什么它是必须的,它是如何通过硬件或软件来完成的,荧光补
偿是如何时影响数据视觉效果的,最后是如何设计一个最佳的实验来获得一个正确
的荧光补偿。通过完整地阅读本章节,读者将学会为实验正确地设置荧光补偿并
在出版物中识别出补偿设置不当的数据,并能够明白这些错误是如何影响分析结果
的。尽管全面的阐述荧光补偿不可避免地要涉及到一些线性代数的问题,但正确
掌握荧光补偿并不一定要求要掌握它;在这两部分内容中的问题可根据你的意愿撇
去或跳过。
流式细胞仪荧光补偿--第1页
流式细胞仪荧光补偿--第2页
大部分的流式用户不能正确回答图1中的三个问题。对于问题1的正确答案是
“样本2”。对于问题2,答案中十字门虚线的位置就不正确。最后,第三个问题
的正确答案是:“不可能决定哪个图形中的荧光补偿是正确的”,因此其中没有哪
个可以说中正确的。
如果一个正确的荧光补偿对于流式数据分析这么重要,并且又这么少的人知道
如何正确地去设置它,而为什么到目前为止流式细胞仪的分析结果还都不错。对于
此问题的简单答案是绝大多数类型的数据分析并不绝对需要正确的荧光补偿。此问
题的另一个答案是不正确的荧光补偿在双色或三色分析中显得并不十分重要。然而
随着五色分在大多数实验室中开展,如果这些个问题持续下去将会导致实验失败。
来说,思考在图1中的图谱,可以发现即使荧光补偿并不正确但仍可以正
确计算细胞亚群的比例。然而计算这些细胞亚群的比例必须以单染的样本为对照,
而不是以各个荧光的同型对照染色为对照~正确的设门应该是以CD3FITC和
PEisotype染色样本为基础。
图1中还显示了荧光补偿在正确检测抗原荧光表达强度中重要影响。在此,任
何不正确的荧光渗漏都会误导分析结果。此外,正确的荧光补偿在将弱阳性群体
与阴性群体正确区分中有极其重要的作用;荧光补偿不足会导致弱阳性群体是假阳
性颗粒增多,而过度补偿则会丢失弱阳性群体而导致假阴性。
注意在补偿调节不当的数据中正确计算的亚群数量的现象在三色或更多荧光分
析实验中可能不成立。在本章的结尾将给出一个计算失败的这种案例。此外还讨
论了如何为分析数据设计一个正确的染色对照(甚至当荧光补偿设置并不正确时)。
这些称为“缺一型荧光染色”或FMO对照是进行正确多色荧光分析的前提保证。
荧光补偿基础
荧光补偿是指修正荧光光学信号在探测器之间相互渗漏并被数字化检测的过
程。
您可能关注的文档
- 粮食安全简单总结汇报五篇(精选).pdf
- 浅谈当前制约农村兽医防疫工作的因素及对策.pdf
- 浅谈培智数学学生核心素养的培养与实践.pdf
- 浅谈人防工程造价控制.pdf
- 浅析电子信息工程中数字信号的有效运用.pdf
- 浅析多媒体技术在高校乒乓球教学中的运用价值.pdf
- 活动义齿(活动义齿加树脂牙流程).pdf
- 注册给排水工程师专业考试大纲科目分值参考课本.pdf
- 注册安全工程师安全生产管理知识过关必做1500题(含历年真题).pdf
- 河南省驻马店市平舆县2022-2023学年九年级上学期期末语文试题(含答案).pdf
- 第18讲 第17课 西晋的短暂统一和北方各族的内迁.docx
- 第15讲 第14课 沟通中外文明的“丝绸之路”.docx
- 第13课时 中东 欧洲西部.doc
- 第17讲 第16 课三国鼎立.docx
- 第17讲 第16课 三国鼎立 带解析.docx
- 2024_2025年新教材高中历史课时检测9近代西方的法律与教化含解析新人教版选择性必修1.doc
- 2024_2025学年高二数学下学期期末备考试卷文含解析.docx
- 山西版2024高考政治一轮复习第二单元生产劳动与经营第5课时企业与劳动者教案.docx
- 第16讲 第15课 两汉的科技和文化 带解析.docx
- 第13课 宋元时期的科技与中外交通.docx
文档评论(0)