微生物学实验思考题.pdfVIP

1.用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么

作用？答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再

高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.

油的折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比.

2.列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在使用高倍镜及油

镜时应特别注意避免粗调节器的误操作

答：使用高倍镜和油镜时镜头距离标本较近，而粗调节器的调节幅度较

大，粗调节器的误操作会使镜头大幅度向标本移动，很容易损坏标本和镜头。

一般先用低倍镜找到物象后换到高倍镜，就只需要用细调节器了。

3.什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？

答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器

将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象

称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍

数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于

使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。

4.影响xx分辨率的因素有哪些？

答：物镜的NA值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长

5.根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜

进行有效地观察

答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍

镜调到合适的视野和合适的清晰度。

答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40倍的物镜就可以看

了，细菌小，要用放大1000倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微

镜看了。

6.哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？

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答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节

7.进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出

现什么问题?答：着色不均，染色效果不好。阴性阳性不明显分不太清楚,问题

是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌

8.革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌

和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色?

答：不可以。因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞

的细胞壁，对实验结果造成影响。脱色后复染前，革兰氏阳性菌呈紫色，阴性

菌无色。

9.不经过复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌？

答：不行。在复染之前，革兰氏阴性菌是无色透明的，在显微镜下很难观

察到；或者之前脱色过度，也会造成阳性菌脱色，不经过复染，无法进一步区

别。

10.你认为制备细菌染色标本时,应该注意哪些环节?

答:1、

11.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?

答:1、若未完全干燥,载玻片上的液体会污染油镜镜头。镜头非常精密,被污

染后不利于下次观察；2、若未完全干燥，水滴会影响油与玻璃之间折光率，造

成视野不够清晰。

12.如果涂片未以热固定,将会出现什么问题?加热温度过高、时间太长，又

会怎么样呢？答:如果没有加热固定的话，水分蒸发太慢或者在染色时菌体会被

冲洗掉；如果加热时间过久，菌体变形或形态破坏，无法染色。

13.制备培养基的一般程序是什么？

答：称量——溶解—调PH值—融化琼脂—过滤分装—包扎标记——灭菌——

倒平板

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14.做过本次实验后，你认为在制备培养基时要注意些什么问题？

答：溶解配料的水要适量；PH要调到左右；要小心手提式高压锅的使用；

倒平板时要防止培养基被污染

15.灭菌在微生物学实验操作中有何重要意义？

答：防止培养基被污染；防止杂菌影响实验结果

16.试述高压蒸汽灭菌的操作方法和原理。

答：高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不

断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在的压力下，锅内

温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

操作方法：加水——装料、加盖——排气——升压、保压、和降压——取料

17.高压蒸汽灭菌时应注意哪些事项？

答：第一，无菌包不宜过大，不宜过紧，各