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动物细胞工程的基础动物细胞培养细胞核移植动物细胞工程技术动物细胞融合单克隆抗体制备

2.2.1动物细胞培养和核移植技术

（一）、概念是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。（二）、原理细胞分裂增殖

（三）、过程取动物器官和组织胰蛋白酶处理单个细胞幼龄动物剪碎组织胰蛋白酶处理单个细胞原代细胞培养传代细胞培养细胞悬浮液

归纳取动物胚胎或幼龄动物的组织、器官过程胰蛋白酶单个细胞培养加入液细胞悬浮液原代培养接触抑制贴满瓶壁的细胞1-10代细胞

遗传物质遗传物质原代细胞胰蛋白酶加培养液未改变传代培养40—50代细胞(细胞株)无限传代（细胞系）已改变

有关概念v原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。v传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

有关概念细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。

细胞接触抑制细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。

思考题：1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。

3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。4、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能

6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？注意时间的控制7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近

（四）、动物细胞培养的条件1、无菌、无毒的环境添加一定量的抗生素，定期更换培养液2、营养添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。保证细胞顺利的生长增殖

3、温度和PH培养室中控制,使之达到36.5±0.5℃,7.2~7.44、气体环境：培养箱中提供O和CO（95%空气和5%CO）222

（五）、动物细胞培养技术的应用（1）培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植（2）基因工程的受体细胞（3）细胞的生理、药理、病理研究

资料一：

资料二：培养的动物细胞可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。

资料三：人工关节——软骨再生1.第一次手术:从病人关节软骨中未受力的部分，取出一片约为葡萄干大小的健康软骨组织。2.分离软骨细胞并经三星期的体外培养，使细胞数增加约10～20倍。3.第二次手术:清理软骨受损的部分，从下方骨头部位取出一片约与伤口大小相同的骨膜，缝在伤口上方，再将软骨细胞注射到骨膜下方。结果:经过复健一年后即可恢复正常的生活。

植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的细胞全能性增殖培养基特有成分蔗糖、植物激素葡萄糖、动物血清细胞株、细胞系培养结果植物体培养目的快速繁殖、培育获得无病毒植株细胞,某些蛋白质

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（一）、动物细胞核移植的概念：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.克隆动物：用核移植的方法得到的动物。

（二）、分类：细胞分化程度低，恢复全能性容易胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能性困难

高供体卵细胞培养供卵奶牛（产奶牛细胞培养三）、供体细胞去核卵细胞体细胞的核移植过程合两电细刺胞激融使无性生殖重组细胞重组胚胎胚胎移植代孕母牛C新个体

（四）、体细胞核移植技术的应用前景1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程2、保护濒危物种3、生产医用蛋白质及组织器官的移植的供体

（五）、体细胞核移植技术存在的问题1、克隆动物基因组重新编程的