大肠杆菌感受态细胞制备和转化.pptVIP

0.1mol/L的CaCl2LB液体培养基LB固体培养基Kana母液:卡那霉素(Kanamycin)母液:配成100mg/ml水溶液,-20℃保存备用

3.试剂三.操作步骤本实验以E.coliDH5a菌株为受体细胞,并用CaCl2处理,使其处于感受态,然后与质粒共保温,实现转化。由于质粒带有卡那霉素抗性基因,可通过卡那霉素抗性来筛选转化子。如受体细胞没有转入质粒,则在含卡那霉素的培养基上不能生长。能在卡那霉素培养基上生长的受体细胞（转化子）肯定已导入了质粒。转化子扩增后,可将转化的质粒提取出,进行电泳、酶切等进一步鉴定。受体菌的培养

1)从LB平板上挑取新活化的E.coliDH5α单菌落,接种于3-5mlLB液体培养基中,37℃,180rpm振荡培养过夜；2)将该菌悬液以1:30-100的比例接种于100mlLB液体培养基中,37℃振荡培养2－3小时至OD600在0.3-0.4左右;3)无菌条件下取1.5ml菌液到eppendorf管中,冰浴10min,4℃,8000rpm离心5min;4)彻底弃上清液,在冰浴上加入500ul预冷的无菌CaCl2(0.lmol/L)使细胞悬浮；