优质课DNA的粗提取与鉴定课件.pptVIP

一、基础知识（一）提取DNA的方法1.提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子2.提取DNA的基本思路（DNA的粗提取）利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。

3.DNA等大分子的理化性质DNA和蛋白质等其他成分⑴DNA的溶解性在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同⑵DNA不溶于酒精溶液利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀；⑶DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性或者让其他成分溶解，DNA析出

4、DNA的在溶N解aCl性溶液浓度低于0.14当氯化钠的物质的量浓度为2mol/L时，DNA的溶解度随mol／L时，DNA的溶解度最大，DNA和蛋白Na质Cl等溶液其浓他度成的分增在加而不逐同渐浓度的NaCl溶液中溶解度不降低；在0.14mol/L时，同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，DNA溶解度最小；当NaCl溶析出而使杂质沉淀，或者相反溶解度又逐渐增大。①根据DNA在NaCl溶液中的溶②如何通过控制NaCl溶液的浓解度曲线图，思考在什么浓度使DNA在盐溶液中溶解或析度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？

⑵DNA不溶于酒精溶液DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。⑶DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶——水解蛋白质，对DNA没有影响②高温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂——瓦解细胞膜，但对DNA没有影响

（二）DNA的鉴定试剂：二苯胺条件：沸水浴现象：沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色

二、实验设计（一）实验材料的选取（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液（三）除去滤液中的杂质(纯化)（四）DNA的析出与鉴定

（一）实验材料的选取从下列材料中选取2～3种菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；在液体培养基中培养的大肠杆菌原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑但是，选用DNA含量相对较高的组织，成功的可能性更大材料：新鲜的鸡血（注意要加入柠檬酸钠，防止血液凝固）思考题：能否选用牛、羊、猪红细胞血做实验材料？为什么？不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核

（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞动物细胞的破碎较易，以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。

2、植物细胞①植物细胞需要先讨论：加入洗涤剂和食用一定的洗涤剂溶盐的作用分别是什么？解细胞膜答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解

讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等

思考：加入蒸馏水的目的是什么？加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA思考题：搅拌的目的（注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能过快过猛，防止打碎DNA）加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA思考：这个步骤过滤获得什么？获得含核物质的滤液（获取含DNA的滤液）（注意：此时释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起，应用3——4层纱布进行过滤，除去一些颗粒较大的杂质）思考：滤液中可能含有哪些细胞成分？可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质（为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理）

（三）除去滤液中的杂质1.DNA的溶解性方案一、在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再加入蒸馏水，调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤除去溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。思考：加入2mol/L的NaCl溶液，搅拌1min，注意应沿一个方向，目的是？目的是使DNA充分溶解思考：过滤溶解有DNA的2mol/L的NaCl溶液，获得什么？含DNA的滤液思考：这一步过滤的目的是？含DNA的滤液，除去不溶的杂质

DNA的析出将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。加蒸馏水降低NaCl溶液浓度，使DNA析出。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一