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酶类药物的提取进展

尹利顺,张亚红,王小鹏(药物制剂B0902,图西106)

生物体类的各种化学反应几乎都市在特异的酶的催化下进行的,

故而酶类药物起着重要的作用。药用酶最早是从动物脏器中提取而来,

到20世纪60年代后期逐渐发展到从未生物发酵液中获取大量酶类。

进入70年代后,开始利用人的某些组织的细胞培养技术和基因工程

的书段来获取有关酶的研究资料与信息。

(一)生物提取法

1.提取

一般在提取前,应通过调查研究,文献检索,详细了解欲提取酶

的性质,例如等电点、pH、温度、激活剂、抑制剂、稳定性等。提取

方法主要有水溶液法,有机溶剂法和表面活性剂法三种。

(1)水溶液法

常用稀盐溶液或缓冲液提取。经过预处理的原料,包括组织糜、

匀浆、细胞颗粒以及丙酮粉等,都可用水溶液抽提。为了防止提取过

程中酶活力降低,一般在低温下操作,但对温度耐受性较高的酶如超

氧化物歧化酶,却应提高温度,使杂蛋白变性,以利于酶的提取和纯

化。在胃蛋白酶的提取中,为了水解粘膜蛋白,需37℃,2~3小时

的水解提取。pH的选择对提取也很重要,应考虑:①酶的稳定性;

②酶的溶解度;③酶与其它物质结合的性质。选pH的总原则是:在

酶稳定的pH范围内,选择偏离等电点的适当pH。例如,透明质酸酶

为pH3.6,鸽肝乙酰化酶为8.0,前列腺素酶为pH5~6。这是一般规

律,在特殊情况下还得采用特殊方法。如胰脏中的核酸酶、胰蛋白酶、

胰乳蛋白酶要在酸性条件下提取,因为这些酶在酸性条件下稳定。一

般来说,碱性蛋白酶用酸性溶液提取,酸性蛋白酶用碱性溶液提取。

许多酶在蒸馏水中不溶解,而在低盐浓度下易溶解,所以提取时

加入少量盐可提高酶的溶解度。盐浓度一般以等渗为好,相当于

0.15mol/LNaCl的离子强度是最适宜于酶的提取。

(2)有机溶剂法

某些结合酶如微粒体和线粒体膜的酶,由于和脂质牢固结合,用

水溶液很难提取,为此必须除去结合的脂质,且不能使酶变性,最常

用的有机溶剂是丁醇。丁醇具有下述性能:①亲脂性强,特别是亲磷

脂的能力;②兼具亲水性,0℃在水中的溶解度为10.5%;③在脂与

水分子间能起类似去垢剂的桥梁作用。丁醇提取法有二种。一种称均

相法,丁醇用量小,搅拌后即成均相,抽提时间较长。然后离心,取

下层液相层,但许多酶在与脂质分离后极不稳定,需加注意。另一种

称二相法,适用于易在水溶液中变性的材料。其方法是:在每克组织

或菌体的干粉中加5ml丁醇,搅拌20分钟,离心,取沉淀(注意:均

相法是取液相,二相法是取沉淀)。接着用丙酮洗去沉淀上的丁醇,

再在真空中除去溶剂,所得干粉可进一步用水提取。

(3)表面活性剂法

表面活性剂分子具有亲水性的或憎水性的原子基团。有阳离子型、

阴离子型和非离子型的,有天然的,也有人造的。如胆酸、磷脂、十

二烷基硫酸钠等均属之。表面活性剂能与蛋白质结合而分散在溶液中,

故可用于提取结合酶,但此法用得较少。

(二)微生物发酵法与动物细胞培养法

1.提取法

把酶从菌体中或培养液中提取出来,并使之达到与使用目的相适应的

纯度,这是酶提取和精制的任务。用途不同,对酶的质量要求也不同,

其生产方法亦有明显不同。工业生产的酶有二种剂型,即液体制剂和

粉剂。

(1)盐析法

盐析法是酶制剂工业中常用方法之一,MgS0、(NH)S0、NaSO

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是常用的盐析剂,其中用得最多的是(NH)S0,因为它的溶解度在较

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低温度下仍相当高,这点很重要,因为不少酶在低温下才稳定。盐析

法的优点是在常温下不会造成酶的失活,若分级沉淀应用得当,杂蛋

白杂质也较少,适用于多种酶沉淀。

(2)有机溶剂法

用有机溶剂沉淀蛋白质及用分级沉淀法纯化蛋白质已有悠久的

历史。其沉淀蛋白质的能力为丙酮异丙醇乙醇甲醇。当然上述顺

序不是一成不变的,因为还要受温度、pH、离子强度等因素影响。丙

酮沉淀能力最好,但挥发损失多,价格较贵,所以工业上通常采用乙

醇作为沉淀剂。

(3)喷雾干

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