小牛肠碱性磷酸酶的提纯及比活力测定.pptVIP

*实验六

小牛肠碱性磷酸酶的提纯及比活力测定实验目的掌握小牛肠碱性磷酸酶的提取及酶活力测定的原理和方法酶活力:在最适反应条件（25℃）下，每分钟内催化1?mol底物转化为产物所需的酶量为一个酶活力单位，即1U=1?mol/min。酶的比活力:代表酶的纯度，用每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示。比活力=活力（U）/蛋白（mg）=总活力（U）/总蛋白（mg）酶活力的测定方法:分光光度法；荧光法；同位素测定法；电化学法基本知识蛋白质（酶）的分离纯化根据蛋白分子之间特异性的差异,如分子大小,溶解度,电荷等。性质方法分子大小透析、超滤、密度梯度离心、凝胶过滤溶解度等电点沉淀、盐析、有机溶剂沉淀电荷电泳、离子交换层析吸附性质吸附层析（羟基磷灰石层析、疏水层析）配体分子亲和层析的生物亲和力1.粗分级分离主要是利用盐析法、等电点沉淀、有机溶剂沉淀等方法,使目的蛋白与其它较大量的杂蛋白分开,这些方法的特点是简便、处理量大、既能除去大量杂质,又能浓缩蛋白质,但分辨率低。（1）