4.3蛋白质一级结构的测定.pdf

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通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的

(1)测定蛋白质分子中多肽链的数目关系,即可确定多肽链的数目

几条多肽链借助非共价键连接在一起,称为寡聚蛋白质,

如血红蛋白为四聚体,可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍

(2)拆分蛋白质分子的多肽链处理,即可分开多肽链(亚基)

(3)断开多肽链内的二硫桥采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链

测定每条多肽链的氨基酸组成,并计算出氨基酸成分的分

(4)分析每一多肽链的氨基酸组成子比

(5)鉴定多肽链的N-末端和C-末端残基

采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或

蛋白质测序的策略(6)裂解多肽链成较小的片段多套肽段或肽碎片,并将其分离开来

常用的是Edman降解法,并有自动序列分析仪可供使

(7)测定各肽段的氨基酸序列用,此外还有酶解法和质谱法等

利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠,拼

(8)重建完整多肽链的一级结构凑出整条多肽链的氨基酸顺序

一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链,再利用

双向电泳技术分离出各个肽段,用过甲酸处理使S-S断

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