油菜黑胫病抗性鉴定技术规程.docx

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油菜黑胫病室内抗性鉴定技术规程

1范围

本文件规定了油菜黑胫病抗性鉴定技术中孢子悬浮液制备、接种方法、病情调查及抗病性评价和鉴定的方法。

本文件适用于油菜生产品种、新育成品种、区域试验品种、亲本及中间材料的黑胫病抗性鉴定和抗性评价。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

油菜黑胫病phomastemcanker

小球腔菌属（Leptosphaeriabiglobosa）侵染引起的油菜病害。

Leptosphaeriabiglobosa侵染叶片后，形成具有黄色外缘的典型病斑，病斑内含有较少的分生孢子器，且分生孢子较黑、较少。侵染后期，在茎上部形成病斑。

4病原物

4.1病原物来源

病原菌从内蒙古呼伦贝尔油菜地中采集的发病植株上分离获得，结合形态学和分子水平鉴定为Leptosphaeriabiglobosa。致病力为中等水平。

4.2病原物的培养

将保存的黑胫病菌菌丝体接种在PDA平板上，置于25℃培养箱中活化培养。

5孢子悬浮液的制备

将3-5mL无菌水加在已产孢的L．biglobosa平板内，静置10min，用无菌载玻片轻刮平板表面，使孢子充分释放并悬浮于无菌水中，2层无菌纱布过滤获孢子悬浮液，血球计数板计数并稀释到接种所需浓度1×107个/mL。

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6抗病性鉴定

6.1子叶穿刺接种

油菜子叶期，用无菌针在子叶中央轻刺一下，伤口处接种10uL1×107个/mL黑胫病菌孢子悬浮液，同时以接种等量无菌水为对照。接种后，套上内部湿润的塑料袋，21℃下黑暗保湿培养48h以上。

6.2病情调查

接种7-14d后，根据油菜黑胫病子叶接种鉴定病情分级标准（表1）对接种叶片进行调查。

表1油菜黑胫病子叶接种鉴定病情分级标准[1,2]

病级

症状

0

接种点周围无症状可见

1

接种点周围呈轻微黑色，有黄色晕圈

3

接种点周围出现1.5-3.0mm坏死斑，或有黄色晕圈，有的产生孢子

5

接种点周围出现3.0-6.0mm坏死斑，有的坏死组织有明显的边缘

7

组织灰绿色萎蔫，3.0-6.0mm坏死斑，有明显的边缘，有的形成分生孢子器

9

病斑腐烂，叶片枯死，上面有大量的分生孢子器

6.3品种抗性水平划分

根据表2进行油菜抗黑胫病等级划分。

表2油菜黑胫病抗性分级标准[3]

抗病性

病情指数

抗病性

病情指数

高抗(HR)

DI=0

低感(LS)

40＜DI≤60

中抗(MR)

0＜DI≤20

中感(MS)

60＜DI≤80

低抗(LR)

20＜DI≤40

高感(HS)

DI＞80

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