酵母核糖核酸的分离及组分鉴定改.pdfVIP

酵母核糖核酸的别离及组分鉴定

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目的与要求

1.了解稀碱法提取RNA的原理、方法

2.掌握核酸中三大组分的鉴定方法

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原理

v核糖核酸RNA：从细胞核和细胞质中别离出来的

化学物质。

v在蛋白质合成和其他生化反响中起着重要作用，

RNA的结构和DNA的结构类似，都是由核苷酸按照

一定顺序排列成的长链。

vRNA可以分为信使RNA、转运RNA、核糖体RNA以

及其他类型的RNA。

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磷酸

碱基

戊糖

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酵母菌

酵母中主要成分是RNA〔2.67～10.0%)，DNA很

(0.03～0.516%)。

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总RNA的提取:

采用稀碱裂解法，乙醇沉淀RNA,洗涤除杂

质；

RNA组分鉴定:硫酸可使RNA水解，再分别鉴定

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1.核糖的鉴定——苔黑酚(3,5—二羟基甲苯)法

墨绿色

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2.碱基的鉴定——嘌呤碱

嘌呤碱过量浓氨水AgNO3絮状嘌呤银化合物

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3.磷酸的测定——定磷法

(NH4)2MoO4+H2SO4

H2MoO4+(NH4)2SO4

H3PO4+12H2MoO4

H3P(Mo3O10)4+12H2O+12H2O

H3P(Mo3O10)4Mo2O3MoO3(钼蓝.

〕

试剂和器材

v试剂：v器材

0.04MNaOH；酸性乙醇溶液,研钵，天平；

95%乙醇沸水浴，低速台式离

1.5M硫酸；心机。

浓氨水，0.1M硝酸银；

三氯化铁浓盐溶液,苔黑酚乙

醇；

定磷试剂

n材料

干酵母

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一.提取步骤改动：

5g酵母中参加30ml0.04MNaOH，在研钵中研

磨均匀，转入大试管，沸水浴20min，3000转

离心10min，取上清，弃沉淀。

上清液慢慢倾入10ml酸性乙醇中，边加边搅，沉

淀RNA静置5min，3000转离心10min，弃上

清，取沉淀。

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3.将沉淀用95%乙醇洗两次，约6毫升/管，用于除去

外表杂质。第一次将沉淀捣散后再离心5min；第

二次将沉淀捣散过滤，旨在将沉淀誊出来，放在

滤纸上凉干，称量。〔差减法称量，滤纸应提前

称好〕

4.将所有提取物转移到小三角瓶中，加硫酸进行

解，再分别鉴定组份。