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带您认识流式细胞术中的各种图

流式图有很多种，最常用的是流式直方图和流式散点图，还有流

式等高线图。流式直方图只能显示一个通道的信息，流式散点图和流

式等高线图可以同时显示2个通道的信息。

流式通道

流式通道主要可以分为散射光通道和荧光通道：散射光通道有两

个，包括FSC通道和SSC通道，一般所有的流式细胞仪均有这2个散

射光通道；不同型号的流式细胞仪其荧光通道的多少差异较大，有的

甚至没有光通道。

FSC，即前向角散射，它的值代表细胞的大小。细胞体积越大，

其FSC值就越大。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的大小，

利用FSC值对细胞进行分群和分类。SSC，即侧向角散射，它的值代

表细胞的颗粒度（granularity）。细胞越不规则，细胞表面的突起越

多，细胞内能够引起激光散射的细胞器或者颗粒性物质越多，其SSC

值就越大。所以可以利用细胞的SSC值初步比较细胞的颗粒度，利用

SSC值对细胞进行分群和分类。

一般在硏究细胞样品时，首先关注的就是样品中细胞的FSC-SSC

散点图，x轴代表FSC值，y轴代表SSC值，将细胞都显示于该散点

图中，可以初步根据细胞的大小和颗粒度对细胞进行分群和分类。样

品细胞不需要标记任何荧光素偶联抗体，直接上样分析就可以得到样

品细胞的FSC值和SSC值，其值代表的是细胞的大小和颗粒度这两个

基本的物理特征，所以样品的FSC-SSC散点图又称为样品细胞的“物

理图”。

荧光通道表示的不是细胞特有的物理特征，而是其化学特征。如

需要检测样品中是否有细胞表达某一CD分子，则需要标记荧光素偶联

的该CD分子的抗体，表达有该CD分子的细胞就会结合荧光素偶联抗

的该CD分子的抗体，表达有该CD分子的细胞就会结合荧光素偶联抗

体，其中的荧光素被相应的激光激发后产生荧光，该荧光信号通过光

路系统被相应的荧光通道接收，就能得到该样品中是否有细胞表达该

CD分子，以及有多少比例的细胞表达该CD分子等信息。荧光通道接

收到的信号越强，表示细胞上结合的荧光素越多，那么细胞表面表达

的该CD分子就越多，因此可根据荧光信号的强弱判断细胞表达该CD

分子的相对数量。总之，荧光通道值反映接收到的荧光信号的强弱，

从而反映细胞上结合的荧光素的量，进一步反映细胞上表达该CD分子

的量，最后间接反映细胞表达某CD分子这一化学特征。

不同细胞群的FSC值和SSC值最多相差几倍，而荧光信号强弱之

间一般相差很大，阴性细胞与阳性细胞之间、强阳性与弱阳性之间有

时可以相差几十倍、几百倍，甚至几千倍，呈指数关系。所以，流式

图数轴上FSC值和SsC值以“一般数序形式”表示，而荧光通道值常

以“对数形式”（logarithmicscale）表示，在识图时需要注意数轴

的表示形式。当然，并不是所有的荧光通道值都以“对数形式”表示，

当荧光信号值相差不多时，也可以“一般数序形式”表示，如P染色

检测细胞内DNA含量以及Hoechst33342染色分析和分选侧群干细

胞时，均以“一般数序形式”表示。

流式直方图

流式直方图形成的原理与统计学中的直方图相似,是在统计学直方

图的基础上进一步发展而成的。流式直方图的x轴表示一个通道的值,y

轴表示细胞数量。

流式直方图虽不是如此简单，但是基本原理是相同的。流式直方

图是在此统计直方图的基础上，使统计区间不断地缩小，缩小到甚至

可以认为一个值就是一个统计区间，使统计的细胞数量不断地增加，

增加到以万计，甚至以十万计时，相邻的小统计区间内的细胞数相差

不多，这时的直方图好像是由光滑的曲线所围成的。其实，这只是直

方图统计的细胞数达到一定量时视觉上的一个假象，这个由光滑的曲

线围成的流式直方图实际上是由无数个非常小的统计区间组成的为了

方便理解，可以认为x轴上的一个点就是一个统计区间，而曲线上该

点对应的y轴值就是x轴代表的通道的荧光信号值对应的细胞数。这

时，统计细胞群体比例时可以通过计算曲线下所围的面积的比例来表