实验血液学技术课考题汇庞.pdfVIP

01蛋白质的变性作用

在热、酸、碱、重金属盐、紫外线等

作用下，蛋白质会发生性质的改变，而凝

结起来，这种凝结是不可逆的，不能再使

它们恢复为原来的蛋白质，这种作用就叫

做蛋白质的变性作用．蛋白质变性后，就

失去了原来的可溶性，并且失去了它们生

理上的作用，蛋白质的变性属化学变化．

02球形蛋白质结构的一般规律？

所有具有生物活性的蛋白质，如酶、

抗体、激素及毒蛋白等都是近似球形或椭

球形的。其球形蛋白质结构的一般规律

是：

●疏水核与亲水外壳。

●分子表面通常有疏水裂隙，通常

为活性部位。

●分子具有明显的择优性。

●蛋白质组成全部是L型氨基酸。

●α-螺旋、β-折叠全为右手性。

●相似的结构域结合成球状分子总

是对称排列。

●四级结构亚基对称组合。

03蛋白质分离与纯化的一般策略？分离纯

化的要求？

策略先对目标蛋白及其所在环境中

其它蛋白质的分子量、等电点等生化性质

进行初步分析。比如：SDS、IEF-

PAGE等。

先选用通用程序，后用特异性较强的分

离方法；先用处理或负荷蛋白质数量大的

分离方法，后用蛋白质负荷量及上样体积

皆有限的方法。

注意个分离程序前后的衔接。

整个过程要注意快速、低温。

适时加入稳定剂或增溶剂。必要时加

入蛋白酶抑制剂。

（3）细分离：一般使用层析法包括凝

胶过滤，离子交换层析，吸附层析以及亲

和层析等。必要时还可选择电泳法，包括

区带电泳、等电聚焦等作为最后的纯化步

骤。用于细分级分离的方法一般规模较

小，但分辨率很高。

要求1纯度：主要取决于研究的目的和

应用上的要求。如作为研究蛋白质一级结

构、空间结构，一级结构与功能关系的蛋

白质制剂、工具酶和标准蛋白、酶法分析

的酶制剂，都要求均一；工业、方面

应用的酶和蛋白质制剂，达到一定纯度即

可，不要求均一。

2活性：要求大分子保持天然构象状

态，有高度的生物活性。

3收率：希望收率越高越好，但在分

离纯化过程中总有不少损失。而且提纯步

骤越多，损失越大。

蛋白质的功能依赖于蛋白质的结构，

对于有生物活性的蛋白质，在分离纯化过

程中必须根据目标蛋白的特点，采用合适

的操作条件和方法，保证目标蛋白的活性

尽量不损失。除了在分离纯化的初期，要

采用快速的方法除去影响目标蛋白稳定性

的杂质，还要严格控制涉及蛋白质变性的

各种因素，来避免蛋白质失去活性。蛋白

质的构象稳定性在分离纯化和蛋白质

中都很重要，影响蛋白质稳定性的因素有

温度、pH、离子强度、某些添加剂、表面

吸附、震摇、剪切力、冻融、蛋白浓度、

等，这些因素对折叠的影响有的是可

逆的，有的是不可逆的，而且相互之间也

有影响，在实际处理中应选择合适的条

件，尽量避免不利因素的影响，并利用活

性的方法对处理进行评价，指导分离

纯化。

在进行任何纯化工作时，第一步必须针对

目标蛋白建立特异性的分析方法。这些特

异性的分析方法都是基于目标蛋白的一些

特性，如酶的活性，免疫学活性，特

性（如分子量、等电点、光谱学特征

等），生物学