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微生物检验细菌的接种方法

常用的细菌接种方法有平板划线分离法、斜面接种法、穿刺接种

法、液体和半固体接种法、涂布接种法等。下面是yjbys小编为大家带

来的关于微生物检验细菌的接种方法的知识，欢迎阅读。

 一、平板划线分离法

 平板划线分离法:是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体

中的不同细胞用接种环在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较

多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌

落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而

来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固

体培养基表面多次作由点到线稀释而达到分离目的的。

 为方便划线，一般培养基不宜太薄，每皿约倾倒20ml培养基，

培养基应厚薄均匀，平板表面光滑。划线分离主要有分区划线法和连续

划线法两种(如图1，A、B)。

 分区划线法是将平板分四区，故又称四分区划线法。划线时每次

将平板转动60~70deg;划线，每换一次角度，应将接种环上的菌烧死

后，再通过上次划线处划线;

 另一种连续划线法是从平板边缘一点开始，连续作波浪式划线直

到平板的另一端为止，当中不需灼烧接种环上的菌。

 1)连续划线法

 将琼脂平皿半开盖倒置于培养箱内至无冷凝水，接种环于酒精灯

外焰烧至红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环至红。

 轻轻摇匀待接种试管，左手手心托待接种试管底侧部，右手执接

种环，右手小指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，

再插入待接接种液中，蘸一下，取满一环，抽出、烧塞、盖盖、放回试

管架。或将接种环通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处

接触一下使接种环冷却，然后以无菌操作接种环直接取平板上待分离纯

化的菌落。

 于靠近酒精灯处打开平皿盖约30deg;，右手将环伸进平皿，将

菌种点种在平板边缘一处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘(如图2)，抽出

接种环，盖上平皿盖，然后将接种环上多余的培养液在火焰中灼烧，打

开平皿盖约30deg;伸入接种环，待接种环冷却后，再与接种液处轻轻

接触，开始在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培

养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重

叠，划线完毕，关上皿盖。灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。培养

皿倒置于适温的恒温箱内培养(以免培养过程皿盖冷凝水滴下，冲散已

分离的菌落)。培养后在划线平板上观察沿划线处长出的菌落形态，镜

检后再接种斜面。

 2)分区划线法

 取菌、接种、培养方法与连续划线法相似。

 分区划线法分离时平板分四个区，故又称四分区划线法。其中第

4区是单菌落的主要分布区，故其划线面积应最大。为防止第4区内划

线与1、2、3区线条相接触，应使4区线条与1区线条相平行，这样区

与区间线条夹角最好保持120deg;左右。

 先将接种环沾取少量菌在平板1区划3~5条平行线，取出接种

环，左手关上皿盖，将平板转动60~70deg;，右手把接种环上多余菌

体烧死，将烧红的接种环在平板边缘冷却，再按以上方法以1区划线的

菌体为菌源，由1区向2区作第2次平行划线。第2次划线完毕，同时

再把平皿转动约60~70deg;，同样依次在3、4区划线。划线完毕，灼

烧接种环，关上皿盖，同上法培养，在划线区观察单菌落。

 二、斜面接种法

 该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特

性。

 (1)左手平托两支试管，拇指按住试管的底部。外侧一支试管是斜

面上长有菌苔的菌种试管，内侧一支是待接的空白斜面，两支试管的斜

面同时向上。用右手将试管塞旋松，以便在接种时容易拔出。

 (2)右手拿接种环(如握毛笔一样)，在火焰上先将环端烧红灭菌，

然后将有可能伸入试管的其余部位也过火灭菌.

 (3)将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心将两支

试管的试管塞一并夹住拔出，试管塞仍夹在手中，然后让试管口缓缓过

火焰。注意不得将试管塞随意丢于桌上受到沾污，试管口切勿烧得过烫

以免炸裂。

 (4)将已灼烧的接种环伸入外侧的菌种试管内。先把接种环的先端

触及无菌苔的培养基上使其冷却(如果操作迅速，此时接种环尚未完全

冷却)。再根据需要用接种环沾取一定量的菌苔，注意勿刮破培养基。

将沾有菌苔的接种环迅速抽出试管，注意勿使接种环碰到管壁或管口

上。

 (5)迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试