ELISA检测乙肝抗体课件.pptVIP

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实验目的

1.掌握ELISA的原理和操作方法。

2.熟悉酶标仪的使用方法。

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免疫标记技术

免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗

+

原,利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。

+

+细胞1细胞2

分类

荧光素放射性核素酶

放射免疫技术免疫荧光技术免疫酶技术

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用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可用酶标测定仪测

定光密度(OD）来反应抗原或抗体含量,灵敏度可达到ng—pg/ml。

标记物

DH２+H２O２D+2H2O

细胞1

酶具有高效催化性:可加快化学反应的速率；在反应前

后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用

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酶联免疫吸附试验

用于检测可溶性

+抗原或抗体

酶免疫技术

酶免疫组化法

+用于检测组织或细胞

表面的抗原

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ELISA是一种免疫测定（immunoassay，

IA）。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体

的酶标记:加入酶反应的底物后，底物被酶

催化成为有色产物；产物的量与标本中受

检物质的量直接相关，由此进行定性或定

量分析。

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实验原理

+

抗原或抗体吸附到固体相载体表面后,以及抗原抗体与

酶连接后,仍保持免疫活性和酶活性,当酶遇到相应第底物

+时,在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受

检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅进行定性或

定量分析。

+8

（1）免疫吸附剂

（2）结合物

（3）酶反应的底物

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间接法（测抗体）

双抗体夹心发（测大分子抗原）

竞争发（测小分子抗原）

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用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以

测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面，经洗涤

后分成两组:一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另一

组加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物

降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。

这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对

小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点

就是快，因此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标

记抗原。

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1.从冰箱取出试剂盒,室温平衡30分钟。

2.按如下方式加待测血清,每孔1滴。

待1待2待2阳性阴性空白

3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加,无气泡）,混匀,空白孔不加,置37度

温箱30分钟。

4.取出反应板,弃液,拍干。

5.每孔注满洗条液,（不要溢出）静置5秒后弃液,拍干,重复洗条5次,拍干。

6.每孔加显色剂A和B各1滴,置37度温箱15分