DB5117T 100-2024 DNA分子标记选育绿壳蛋旧院黑鸡技术规范.docx

ICS65.020.30

CCSB43

DB5117

四 川 省 （ 达 州 市 ） 地 方 标 准

DB5117/T100—2024

DNA分子标记选育绿壳蛋旧院黑鸡技术规范

TechnicalspecificationsforbreedinggreenshelleggJiuyuanblackchickensusingDNAmolecularmarkers

2024-09-30发布 2024-09-30实施

达州市市场监督管理局 发布

DB5117/T

DB5117/T100-2024

前 言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由达州市农业农村局提出并归口。

本文件起草位：达州市饲草饲料工作站、达州市畜牧技术推广站、达州职业技术学院、西南大学、万源市畜禽品种改良站、万源市聚源旧院黑鸡养殖专业合作社。

本文件主要起草人：张丹萍、王乙茹、俄广鑫、曾艳、黎纯、蒋旭东、庞金柱、王宇、李祥、何武亮。

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DNA分子标记选育绿壳蛋旧院黑鸡技术规范

范围

本文件规定了DNA分子标记选育绿壳蛋旧院黑鸡的技术要求。本文件适用于绿壳蛋旧院黑鸡的DNA分子标记选育。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T40188畜禽分子标记辅助育种技术规程

NY/T823 家禽生产性能名词术语和度量计算方法NY/T1673 畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程NY/T2695 牛遗传缺陷基因检测技术规程

DB5117/T31 地理标志产品旧院黑鸡DB5117/T99 旧院黑鸡繁育技术规程

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

DNA分子标记DNAMolecularMarkers

DNA分子标记(DNAMolecularMarkers)，是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是DNA水平遗传多态性的直接的反映。分子标记是生物遗传标记的一种，通过引物设计的不同，用PCR的方法在生物的基因组DNA上扩增出相关条带，通过电泳、软件识别、分析，可用作生物遗传信息的研究。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。Bp：basepair，碱基对；

DNA：deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸；PAGE：polyacrylamidegelelectrophoresis，聚丙烯酰胺凝胶电泳；PCR：polymerasechainreaction，聚合酶链式反应；

Taq酶：Taq-DNApolymerase，耐热DNA聚合酶；ddH2O：双蒸水（超纯水）。

DNA分子标记选育绿壳蛋旧院黑鸡技术的适用范围

应符合DB5117/T31规定区域内的旧院黑鸡种公鸡和产绿壳蛋旧院黑鸡种母鸡。

要求

选育技术

组建选育基础群

选择22~30周龄产绿壳蛋种母鸡和性成熟种公鸡组建选育基础群，公母比例1:5~1:8，群体规模不低于2000只。

基础群体重、体尺的测定应按照NY/T823的要求执行。

基础群产蛋性能应符合DB5117/T99的规定。

基础群外貌特征和生产性能应符合DB5117/T99的规定。

基因筛选方法

样品采集、制备

对基础群个体翅下静脉采血，样品标记，贮存于不高于-20℃容器中送样。

样品整理核对

对样品编号进行核对，录入相关系统。

DNA提取

应采用全血DNA提取试剂盒提取基础群个体DNA，提取方法应按照GB/T40188的要求执行。

DNA浓度和纯度的检测

用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA浓度和纯度，检测结果见图1。选留泳道中的DNA样品带型清晰、整齐，无明显的拖尾现象样品，并用ND-10001紫外分光光度计检测其浓度和纯度，选OD260/280值均在1.8~2.0的样品，置于-20℃保存。

图

图1鸡基因组DNA的0.8%琼脂糖凝胶电泳结

目标片段筛选

引物序列设计

宜采用PrimerPremier5.0分析设计引物，用引物筛选目标片段应符合表1的要求，扩增片段长度为364bp和/或190