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伤寒沙门菌fljB∶∶lacZ变异株的制备
【摘要】目的：为研究伤寒沙门菌z66鞭毛抗原编码基因fljB的表
达调节机制，建立该fljB基因的β-半乳糖苷酶基因（lacZ）插入变
异株。方法：采用自杀质粒介导的同源重组方法进行制备。设计加接
KpnⅠ和SalⅠ的特异性引物，用PCR扩增获得fljB基因的上、下游
同源性DNA片段，并与用KpnⅠ和SalⅠ酶切pSV-β-半乳糖苷酶载体
（pSV-β-galactosidasevector）的片段定向连接，将连接片段克隆
至自杀质粒pGMB151，再通过电击法将重组质粒转入伤寒沙门菌，在
含X-Gal的蔗糖平板上筛选获得同源重组的变异株。结果：经筛选获
得阳性克隆，经PCR及序列分析证实，fljB基因中的763bp被3550
bp的lacZ片段替代。结论：成功构建伤寒沙门菌flj∶∶lacZ突变
株，为进一步研究fljB基因表达调节机制奠定了基础。
【关键词】伤寒沙门菌；fljB基因；β-半乳糖苷酶基因；基因
融合
［Abstract］Objective:Tostudythemechanismsof
expressionalregulationoffljB∶z66,thefljB∶∶lacZmutant
strainofSalmonellaentericaserovarTyphiwasconstructed.
Methods：Themutantstrainwaspreparedbythemethodof
homologousrecombinationmediatedbysuicideplasmid.The
specialprimerswithKpnⅠandSalⅠsitesrespectivelywere
designed,theupper-anddown-streamhomologousfragmentsofthe
fljBgenewereamplifiedbyPCR,alacZcassettefromthepSV-
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β-galactosidasevectorwaslinkedwiththeupper-and
doun-streamhomologousfragmentsrespectively.Theresulting
productwasinsertedviaSmaⅠsitesintothesuicideplasmid
serovarTyphiweretransformedwithrecombinantplasmidby
electroporationtransformation,selectedinthesucroseplate
containingX-Gal.HomologousrecombinantswerescreenedbyPCR.
Results：A3550bpinsertioninfljBgenewasconfirmedi
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