食品中泛酸的测定 预包被微孔板式微生物.docx

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食品中泛酸的测定预包被微孔板式微生物法

1范围

本文件规定了食品中泛酸测定的预包被微孔板式微生物法。

本文件适用于饮料、糖果、调制乳粉、婴幼儿配方食品、婴幼儿辅助食品、特殊医学用途配方食品、保健食品、谷物及其制品、蛋类和乳类食品中泛酸含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

泛酸是预包被微孔板中植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum,ATCC8014)生长所必需的营养素。在一定控制条件下,在泛酸测定培养基中,植物乳杆菌的生长与待测试样中泛酸的含量呈线性关系,将吸光度与标准工作曲线进行比较,即可计算出试样中泛酸的含量。

4试剂和材料

4.1试剂

4.1.1预包被微孔板式泛酸微生物法试剂盒(VitaFast勇PantothenicAcid):参见附录A。

4.1.2除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,实验用水应符合GB/T6682规定的二级水要求。

4.1.3氢氧化钠(NaOH)。

4.1.4盐酸(HCl)。

4.1.5高温淀粉酶(≥1.5U/mg)。

4.1.6一水合柠檬酸(C6H8O7·H2O)。

4.2试剂配制

4.2.11mol/L氢氧化钠:称量4.00g氢氧化钠,加水溶解后,转移至100mL容量瓶中,加水定容至刻度。

4.2.21mol/L盐酸:量取87.72mL浓盐酸,置于1000mL容量瓶中,加水定容至刻度。

4.2.3柠檬酸盐缓冲液:称取1.50g一水合柠檬酸至烧杯中,加入约50mL水溶解,再加入12mL1mol/L的氢氧化钠,用1mol/L盐酸调整pH至4.5,将溶液转入100mL容量瓶中,加水定容至刻度。

5仪器和设备

5.1水浴锅:95℃±1℃,37℃±1℃。

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5.2恒温培养箱:37℃±1℃。

5.3均质器。

5.4超净工作台。

5.5离心机:≥8000g。

5.6酶标仪:波长610nm~630nm或540nm~550nm。

5.7涡旋混合器。

5.8电子天平:感量0.01g。

5.9微量可调单通道移液器及配套枪头:10μL~100μL、50μL~200μL、100μL~1000μL。

5.10无菌离心管:1.5mL~2mL、15mL、50mL。

5.11锥形瓶:500mL。

5.12容量瓶:100mL和1000mL。

5.13无菌注射器:10mL。

5.14无菌聚醚砜滤膜(PES):0.22μm。

6分析步骤

6.1试样制备

固体试样需粉碎、研磨、过筛(筛板孔径0.3mm~0.5mm);半固体试样需混匀;液体试样需振摇混合。

6.2试样提取

6.2.1饮料

准确称量1.00g固体试样或移取1mL液体试样至50mL无菌离心管中,加水至40mL,涡旋混匀后,试样溶液用无菌注射器和无菌聚醚砜滤膜无菌过滤至2mL无菌离心管中。此为稀释倍数为40的样品液。

6.2.2糖果

准确称量1.00g试样至50mL无菌离心管中,加水至40mL,涡旋混匀后,置于95℃水浴30min,使试样溶解,其间颠倒混匀至少5次,并确保离心管紧闭。水浴结束后,置于冰浴迅速冷却到30℃以下,试样溶液用无菌注射器和无菌聚醚砜滤膜无菌过滤至2mL无菌离心管中。此为稀释倍数为40的样品液。

6.2.3调制乳粉、婴幼儿配方食品、婴幼儿辅助食品、特殊医学用途配方食品

准确称量1.00g试样至50mL无菌离心管中,加水至40mL,涡旋混匀后,置于95℃水浴30min,其间颠倒混匀至少5次,并确保离心管紧闭。水浴结束后,置于冰浴迅速冷却到30℃以下,试样溶液用无菌注射器和无菌聚醚砜滤膜无菌过滤至2mL无菌离心管中。此为稀释倍数为40的样品液。

6.2.4保健食品

准确称量1.00g试样,置于500mL锥形瓶,加入400mL水,混合均匀后,置于95℃水浴30m