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同源重组与GibsonAssembly方法构建腺病毒载体

邓楚钟;潘耀振

【摘要】目的：对比同源重组与GibsonAssembly两种方法构建腺病毒载体的

效率。方法：增殖并提取AD4DNA，分别用同源重组与GibsonAssembly两种

方法，将AD4DNA镶嵌入pBR322质粒，构建出携带有全长AD4DNA的腺病

毒载体，并进行PCR和测序鉴定，对比两种方法构建腺病毒载体的筛选效率。结

果：两种方法均能构建出正确的腺病毒载体；筛选同源重组法1000个菌落中，鉴

定360个，仅有1个菌落；GibsonAssembly法112个菌落数中，鉴定其中10

个，有3个阳性。结论：GibsonAssembly方法比传统同源重组方法在构建腺病

毒载体时更有效。%[Abstract]Objective:Tocomparetheefficiencyof

traditionalhomologousrecombinationmethodwithGibsonAssembly

methodinconstructingadenovirusvector.Methods:AD4DNAwas

proliferatedandextracted,andinlaidAD4intothepBR322DNAplasmid

andconstructedadenovirusvectorwithtotallengthoftheAD4DNAby

homologousrecombinationmethodorGibsonAssemblymethod,which

wasamplifiedbyPCRandsequencedforidentification.Then,theefficiency

oftwomethodswascom-pared.Results:Bothmethodscouldconstructthe

adenovirusvectorofrightsequence.Therewereo-ver1000coloniesin

theplateusinghomologousrecombinationmethod,amongwhich360

colonieswereidentifiedandtherewasonlyonepositiveresult.Although

therewereonly112coloniesintheplateusingGibsonAssembly,10

coloniesamongthenwereidentifiedandtherewerethreepositivere-sults.

Conclusion:GibsonAssemblymethodismoreefficientthantraditional

homologousrecombina-tionmethodinconstructingadenovirusvector.

【期刊名称】《贵阳医学院学报》

【年(卷),期】2016(041)004

【总页数】6页(P430-435)

【关键词】腺病毒;疫苗;重组载体;GibsonAssembly

【作者】邓楚钟;潘耀振

【作者单位】贵州医科大学附院肝胆外科，贵州贵阳550001;贵州医科大学附院

肝胆外科，贵州贵阳550001

【正文语种】中文

【中图分类】R346

腺病毒是一种无包膜的双链DNA病毒，分子量为150MDa，直径约为950Å，

它是已知最大和最复杂的无包膜DNA病毒之一[1]。腺病毒广泛存在于自然中，

能通过呼吸道、消化道、眼黏膜等途径感染动物和人，无论增殖和非增殖细胞均可

以被感染，但对人类的致病性低。由于腺病毒和人类基因组同源，感染后不会整合

到人染色体中，不会导致染色体突变。因此，将腺病毒作为抗原呈递载体构建疫苗，

具有高效、安全、给药方便的优点，可以激发机体天然免疫反应，同时便于保存及

成本易控[2-9]，这些优势使得腺病毒载体成为疫苗研究的热点。同源重组方法构

建腺病毒载体是目