细胞培养常用试剂.ppt

关于细胞培养常用试剂Hank’s液D-Hank`s液PBSEDTA胰蛋白酶青霉素、链霉素第2页,共16页，星期六，2024年，5月Hank`s液与D-Hank`s液

Hank`s液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。D-Hank`s液则是无钙镁离子的Hank`s液（也有资料认为除了不含钙镁离子之外也不含葡萄糖）。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在这种BSS中可生存几个小时。第3页,共16页，星期六，2024年，5月Hank`s液配方Hank`s液（原液）

??????原液甲：NaCl?????????????????????????????160g

????????????????????????KCl?????????????????????????????????8g

????????????????????????MgSO4·7H2O???????????????2g

????????????????????????MgCl2·6H2O?????????????????2g

?????上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。

????????????????????????CaCl2??2.8g溶于100ml双蒸水

?????上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

??????原液乙：??Na2HPO4·12H2O???????????????3.04g

?????????????????????????KH2PO4???????????????????????????????1.2g

?????????????????????????葡萄糖???????????????????????????????????20g

?????????????????????????加入800ml双蒸水，溶解。?

?????????????????????????0.4%酚红溶液?????????????????????100ml

???????上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

???????使用时甲，乙原液按下列比例配成Hanks液???使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO3调整pH值。第4页,共16页，星期六，2024年，5月D-Hank`s液配方D-Hanks液?

????????????NaCl????????????????????????????????4.5g

????????????KCl??????????????????????????????????0.2g

????????????NaHCO3????????????????????????0.175g????

????????????Na2HPO4·12H2O?????????0.076g

????????????KH2PO4?????????????????????????0.03g

????????????葡萄糖????????????????????????????0.5g

????????????0.4%酚红???????????????????????2.5ml

????????将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中，最后加双蒸水定容至500ml，以5.6%NaHCO3调整pH值至7.4，4℃冰箱保存备用。第5页,共16页，星期六，2024年，5月酚红在低pH值时呈现黄色,在pH6.6至8.0间会呈现橙色，在高pH值时呈现红色。酚红只是起指示酸碱度的作用，有酚红较方便但没有也无妨。有人主张最好不用酚红，可能对细胞生长不利，有时也会影响一些检测结果。此外酚红有雌激素样作用，所以如果做相关的实验最好不加。第6页,共16页，星期六，2024年，5月对于Hank`s与D-hank`s液的配制，不同的文献有不同的配方我们可以看到，两者最主要的区别就是D-hank`s液中没有钙镁离子。第7页,共16页，星期六，2024年，5月Hank`s液与D-Hank`s液

用途上的比较Hank`s液是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗涤组织、细胞等。细胞在Hank`s液中可以在一段时间内维持一定的活力。另外Hank`s液还可以用于终止EDTA的作用。配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基础液都是D-hanks液，而不能使用Hank`s液。这是由于钙离子和镁离子会影响胰蛋白酶的活