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SMA分子检测进展董欣生物化学与分子生物学21620101152298Evaluationonly.edwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfiCopyright2004-2011AsposePtyLtd.

进行性近端型脊髓性肌肉萎缩症,简称脊髓性肌肉萎Ev缩aluationonly.edwi症th（ASspoisnea.lSlidesfor.NET3.5ClientProfiMuscCuolpayrright2004-2011AsposePtyLtd.Atrophy）,SMA

SMA属于常染色体隐性遗传病,发病率为1//6000-1/10000。Evaluationonly.edwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfiCopyright2004-2011AsposePtyLtd.

临床上根据SMA发病年龄和病程的不同将其分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Ⅰ型（Werding-Hoffman病），又称严重型SMA.急性型SMA.婴儿型SMA，一般在两岁之前死亡Ⅱ型,又称中间型,是一种中等程度的SMA,大 Ⅲ型（Kugelberg-Welander病）,又称成人型,属于轻型脊髓性肌萎缩症,其发病年龄从一岁半至成年Evaluationonly.edwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfi多仅能Co存py活r两ig年ht2004-2011AsposePtyLtd.

SMA相关基因运动神经元生存基因——SMN SMN基因定位于5号染色体长臂1区(sqll.2一13.3E)valuationonly.ed?wi近th端As粒poSsMeN.tS(lSiMdNe1s)for.NET3.5ClientProfi近着C丝op粒yrSiMgNhct(2S0M0N42-)2011AsposePtyLtd.两者之间仅存在5个碱基的差距

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多重连接探针扩增技术MLPA的基本原理包括探针和靶序列DNA进行杂交,之后通过连接、PCR扩增,产物通过毛细管电泳分离及数据收集,分析软件对收集的数据进行分析最后得出结论。每个MLPA探针包括两个荧光标记的寡核苷酸片段,一个由化学合成,一个由M13噬菌体衍生法制备；每个探针都包括一段引物序列和一段特异性序列。在MLPA反应中,两个寡核苷酸片段都与靶序列进行杂交,之后使用连接酶连接两部分探针。连接反应高度特异,只有当两个探针与靶序列完全杂交,即靶序列与探针特异性序列完全互补,连接酶才能将两段探针连接成一条完整的核酸单链；反之,如果靶序列与探针序列不完全互补,即使只有一个碱基的差别,就会导致杂交不完全,使连接反应无法进行。连接反应完成后,用一对通用引物扩增连接好的探针,每个探针的扩增产物的长度都是唯一的,范围在130～480bp。最后,通过毛细管电泳分离扩增产物,Genemarker软件分析,得出结论。只有当连接反应完成,才能进行随后的PCR扩增并收集到相应探针的扩增峰,如果检测的靶序列发生点突变或缺失、扩增突变,那么相应探针的扩增峰便会缺失、降低或增加,因此,根据扩增峰的改变就可判断靶序列是否有拷贝数的异常或点突变存在。现有的分子诊断方法半定量PCRFISHEvaluationonly.ed?wi荧th光As实po时se定.定Sl量idPeCsRfor.NET3.5ClientProfiPCR-CRoFpLyrPight2004-2011AsposePtyLtd.PCR-SSCPMLPA多重PCR结合DHPLC等。

Evaluationonly.edwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfiCopyright2004-2011AsposePtyLtd.应用PCR-SSCP技术检测SMA

SMA患者SMN1基因具有第7,8号外显子的缺失,而SMN2未见缺失 聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）PCR扩增特定靶序列Evaluationonly.e