细胞化学染色课件课件.ppt

2.试剂（1）固定液：甲醇（2）酸性亚铁氰化钾溶液：200g/L亚铁氰化钾5份，浓盐酸1份。取200g/L亚铁氰化钾溶液置于试管中，缓慢加入浓盐酸，边滴边摇由开始的白色沉淀消失为至。（3）复染剂：0.5%沙黄*第62页,共83页，星期六，2024年，5月3.操作步骤（1）选片做标记，甲醇固定10min（2）37℃滴加酸性亚铁氰化钾溶液染色30min（3）蒸馏水冲洗2min后沙黄复染1min，待干镜检。*第63页,共83页，星期六，2024年，5月4.注意事项（1）所用的玻片及器具必须清洁，无铁污染。（2）应选有骨髓小粒的髓片做铁染色，以便观察细胞外铁。（3）作用液必须新鲜配制。（4）亚铁氰化钾暴露于空气中，易氧化变质，贮于棕色瓶中，避光密封保存。*第64页,共83页，星期六，2024年，5月（5）复染前应充分冲洗，否则铁粒状结晶过多，影响观察。（6）计数时要不停地旋转细螺旋器，因为铁粒在细胞内的高低度不一致，每看一个中、晚幼红细胞要旋转几次，直到看清为止。（7）观察内铁时，幼红及淋巴细胞要分清，幼红细胞核为鲜红色，淋巴细胞核为淡红色，（8）与污染铁的鉴别：污染铁不在髓小粒和细胞内，而是浮在上边，而且蓝中带黑。*第65页,共83页，星期六，2024年，5月5.结果观察：（1）正常幼红细胞核呈鲜红、浆淡黄、铁颗粒呈蓝绿色（2）低倍镜观察细胞外铁：涂片尾部和髓小粒附近阴性：无蓝绿色铁粒。阳性：含有不同程度的铁粒、铁小珠、铁小块。根据阳性程度不同分四级。*第66页,共83页，星期六，2024年，5月*细胞外铁——幼红细胞外的骨髓铁(+)少量铁粒偶见铁小珠（2＋）较多铁粒较多铁小珠(3+)许多铁粒许多铁小珠少量小块状。(4+)极多的铁颗粒铁小珠许多小块密集成堆。第67页,共83页，星期六，2024年，5月细胞外铁观察阳性为蓝绿色沉淀第68页,共83页，星期六，2024年，5月（3）细胞内铁：油镜计数100个中晚幼红细胞；并记录含有蓝色颗粒的铁粒幼红细胞百分率。Ⅰ型胞浆内1-2个铁小粒Ⅱ型胞浆内3-5个铁小粒Ⅲ型胞浆内6-10个铁小粒或1-4粗大颗粒Ⅳ型含铁小粒10个以上或5个以上粗大颗粒环形铁粒幼红细胞：含铁粒在6粒以上，其中2/3以上铁粒围绕核排列，超过1/2周。*第69页,共83页，星期六，2024年，5月骨髓细胞内铁染色1.环形铁粒幼红细胞；2.铁粒幼红细胞第70页,共83页，星期六，2024年，5月*第71页,共83页，星期六，2024年，5月5.正常参考值细胞外铁：+～++（2/3为+，1/3为++）细胞内铁：20%～40%（正常人Ⅰ型多见，少数为Ⅱ型）*第72页,共83页，星期六，2024年，5月7.临床意义：(1)缺铁性贫血:外铁↓或(－)，内铁＜15%。此方法是诊断IDA及指导铁剂治疗的一种辅助方法；经铁剂治疗后细胞内外铁迅速增多。(2)铁粒幼细胞性贫血：内铁阳性率高于40%，可达70%以上，铁粒数目增多，颗粒粗大，可见环铁；外铁多为+2，可达+3～+4。（3）MDS-RAS：内铁阳性率↑，环铁＞15%。*第73页,共83页，星期六，2024年，5月（4）感染性贫血：外铁↑，内铁↓（5）地中海贫血：内铁↑，外铁↑（6）巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再障、白血病：外铁、内铁正常或升高。*第74页,共83页，星期六，2024年，5月三、临床应用第75页,共83页，星期六，2024年，5月对于贫血病例铁染色应作为常规染色外铁↓或(-)，内铁↓：在缺铁性贫血。内、外铁正常或增多：巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血。外铁增多，内铁减少：感染性贫血、肝病性贫血、肾病性贫血。内、外铁均增多：增生异常综合症（MDS）、铁粒幼细胞性贫血。*一、在贫血诊断中的应用第76页,共83页，星期六，2024年，5月在巨幼细胞性贫血和红血病或红白血病，作PAS染色。阵发性睡眠性血红蛋白尿骨髓增生减低者与