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学必求其心得，业必贵于专精
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课题3酵母细胞的固定化
问题导学
一、固定化酶的应用和固定化细胞技术
活动与探究1
1．葡萄糖和果糖有何异同点？葡萄糖异构酶的作用是什么？
2．什么是固定化酶和固定化细胞技术?
3．你能说出固定化酶的制备和作用原理吗？
4．固定化酶是否可以永远地利用下去？
5．对酶或细胞固定的方法有哪些？酶和细胞分别适合用哪种固定方法？
6．从操作角度来考虑，你认为固定化酶技术与固定化细胞技术哪一种对酶活性的影响更小？
7．固定化细胞固定的是一种酶还是一系列酶？如果想将微生物的发酵过程变成连续的酶反应，应该选择哪种方法?
迁移与应用1
下列关于固定化酶的说法错误的是(）。
A．固定化酶的活力也受强酸、高温等因素的影响
B．酶固定化后会使酶的利用率提高
C．利用固定化酶可降低生产成本
D．反应结束后,固定化酶与产物混合成为杂质
直接使用酶、固定化酶技术和固定化细胞技术的比较
直接使用酶
固定化酶技术
固定化细胞技术
酶的种数
一种或几种
一种
一系列酶
常用载体
无
高岭土、皂土、硅胶、凝胶
明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺
制作方法
无
化学结合固定化、物理吸附固定化
包埋法固定化
是否需要
营养物质
否
否
是
催化反应
单一或多种
单一
一系列
反应底物
各种物质(大分子、小分子)
各种物质(大分子、小分子）
小分子物质
缺点
①对环境条件非常敏感，易失活；②难回收，成本高，影响产品质量
不利于催化一系列的酶促反应
反应物不易与酶接近，尤其是大分子物质，反应效率下降
优点
催化效率高、耗能低、低污染
①既能与反应物接触，又能与产物分离；②可以反复利用
成本低、操作容易
二、固定化酵母细胞的实验操作
活动与探究2
1．写出固定化酵母细胞的制备流程。
2．讨论影响制备固定化酵母细胞实验的关键步骤是什么？
3．配制海藻酸钠时小火间断加热并不断搅拌的目的是什么？
4．发酵过程中锥形瓶为什么要密封？
5．当观察到哪些现象时，可以说明实验获得成功?
迁移与应用2
下列有关制备固定化酵母细胞的叙述，错误的是(）。
A．溶解海藻酸钠，最好采用持续加热的方法
B．溶化好的海藻酸钠溶液必须冷却至室温才能加入酵母细胞
C．如果海藻酸钠浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞数目少
D．制备凝胶珠时要缓慢地将注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液中
制备固定化酵母细胞的注意事项
（1）酵母细胞的活化：在缺水的状态下,微生物会处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。酵母细胞所需要的活化时间较短，一般需要1h左右，要提前作好准备。此外，酵母细胞活化时体积会变大，因此活化前应该选择体积足够大的容器,以避免酵母细胞的活化液溢出容器。
（2）加热：加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一个环节,影响到实验的成败。如果海藻酸钠浓度过高,将很难形成凝胶珠;如果浓度过低,形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。
（3）凝胶珠的检测：刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。检验凝胶珠的质量是否合格可以使用下列方法：一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。
（4）观察凝胶珠的颜色和形状：如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形,则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试.
答案：
课前·预习导学
【预习导引】
一、1．（1）①强酸、强碱、高温有机溶剂②溶液中的酶生产成本③产物产品质量（2）反应物产物（3）更低更容易
2．（1）果糖含量为42%左右(2)葡萄糖异构酶反应柱上端下端
3．（1)包埋化学结合物理吸附（2）微生物细胞不溶于水琼脂糖海藻酸钠聚丙烯酰胺
预习交流1：提示：将酶固定在不溶于水的载体上，限制了酶分子与底物分子（或离子）的接触,减少了酶与底物的接触面积，降低了化学反应的速度。例如，用肝脏研磨液（内含过氧化氢酶)分解过氧化氢就比用成块的鲜肝分解过氧化氢的速度快，因为成块的鲜肝过氧化氢酶大部分存在于肝细胞内,与过氧化氢的接触面积小，不利于过氧化氢的分解，而肝脏研磨液将过氧化氢酶从肝细胞内释放出来，增加了过氧化氢酶与过氧化氢分子的接触面积,使反应更容易进行。
二、1．（1）休眠状态生活状态(2）CaCl2溶液(3）小火间断加热海藻酸钠(5）注射器中的溶液CaCl2溶液30min
2．(1）蒸馏水
预习交流2：提示：应等到海藻酸钠
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