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脾多肽注射液中多肽含量测定的方法学验证与结果

摘要：目的:测定脾多肽注射液中多肽含量。方法：制备标准曲线，建立紫外-可见分光光度法并进行方法学验证，测定脾多肽注射液中多肽含量。结果：牛血清白蛋白在0.0414mg～0.2070mg范围内与吸光度呈良好的线性关系，所用仪器精密度良好，多肽平均含量为4.3mg/ml，RSD=1.7%，试验结果表明本方法重现性良好。结论：建立的紫外-可见分光光度法准确，可靠，适合脾多肽注射液中多肽含量测定。

关键词：脾多肽；注射液；紫外-可见分光光度法；含量

一、仪器与试药

VARIANCARY50紫外-可见分光光度计；试剂均为分析纯；血清白蛋白（牛）对照品（批号：140619-202024，规格：20.7mg/瓶，购自中检院）。

二、标准曲线的制备

取牛血清白蛋白对照品1瓶，加水溶解并稀释至100ml量瓶中，摇匀，制成每1ml中约含0.2mg的溶液，即得对照品溶液。精密量取对照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液（取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml，使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合，作为乙液。临用前，合并甲、乙两液，并加水至500ml。）1.0ml，摇匀，室温放置10分钟，各加入福林酚试液（取福林试液中的贮备液1→16）4.0ml，立即混匀，室温放置30分钟，照紫外-可见分光光度法（中国药典2015年版通则0401），在650nm的波长处测定吸光度，同时以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与相应吸光度计算线性回归方程。结果表明牛血清白蛋白在0.0414mg～0.2070mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。计算回归方程为：y=1.8991x-0.04543，r=0.9984。

三、仪器精密度（进样重复性）试验

供试品3支，混匀，精密量取2.5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含多肽约0.1mg的溶液。同标准曲线法测定。取供试品溶液，连续依法测定6次，记录吸光度，结果多肽吸光度RSD%为0.3%。表明，所用仪器精密度良好。结果见表1。

表1精密度数据

名称

样1

样2

样3

样4

样5

样6

吸光度

0.2493

0.2496

0.2507

0.2503

0.2498

0.2495

四、重复性

取供试品（批号3支，混匀，精密量取2.5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含多肽约0.1mg的溶液。同标准曲线法测定。同法制备6份，平行测定6次，计算，结果多肽平均含量为4.3mg/ml，RSD=1.7%，试验结果表明本方法重现性良好。结果见表2。

表2重复性数据

名称

吸光度

含量（mg/ml）

均值（mg/ml）

RSD（%）

样1

0.2437

4.18

4.3

1.7

样2

0.2456

4.22

样3

0.2466

4.24

样4

0.2397

4.19

样5

0.2514

4.34

样6

0.2516

4.34

五、准确度试验

取供试品（批号3支，混匀，精密量取2.5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含多肽约0.1mg的溶液。作为供试品贮备液。取牛血清白蛋白对照品1瓶，加水溶解并稀释至100ml量瓶中，摇匀，制成每1ml中约含0.2mg的溶液，作为对照品贮备液。

精密量取供试品贮备液0.5ml和对照品贮备液0.2ml，同标准曲线法测定，平行制备3份，作为回收率溶液1、2、3；精密量取供试品贮备液0.5ml和对照品贮备液0.25ml，同标准曲线法测定，平行制备3份，作为回收率溶液4、5、6；精密量取供试品贮备液0.5ml和对照品贮备液0.3ml，同标准曲线法测定，平行制备3份，作为回收率溶液7、8、9。从回归方程计算多肽的含量，并乘以稀释倍数，即得。结果表明，多肽含量平均回收率为99.1%，结果表明本法回收率较好，准确度较高。

六、结论

建立了紫外-可见分光光度法并进行方法学验证，测定脾多肽注射液中多肽含量。牛血清白蛋白在0.0414mg～0.2070mg范围内与吸光度呈良好的线性关系，所用仪器精密度良好，多肽平均含量为4.3mg/ml，RSD=1.7%，试验结果表明本方法重现性良好。建立的紫外-可见分光光度法准确，可靠，适合脾多肽注射液中多肽含量测定。

参考文献：

[1]张云楚,纪宇.双辛可宁酸法测定胎盘多肽注射液中低浓度多肽的含量[J].中国生化药物杂志,2010,31(06):402-404.

[2]陈秀玲.穴位注射鹿瓜多肽注射液对膝骨性关节炎患者关节液一氧化氮含量的影响[J