微生物学检验技术 课件 33-3综合技能训练：痰液标本微生物检验.pptx

综合技能实训三痰液标本微生物检验

学习目标1．掌握痰液标本的正确采集、运送和微生物检验程序。2．熟悉下呼吸道感染的常见致病菌。3．了解痰液标本中常见致病菌的临床意义。4．具有正确采集痰液标本和进行痰培养操作的能力。5．能正确选择试验项目对痰培养标本进行微生物检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。综合技能训练三痰液标本微生物检验

思维导图综合技能训练三痰液标本微生物检验

一、痰液标本常见病原菌综合技能训练三痰液标本微生物检验

1、球菌革兰阳性：金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌、厌氧球菌革兰阴性：脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌?综合技能训练三痰液标本微生物检验

2、杆菌革兰阳性：白喉棒状杆菌、类白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、炭疽芽胞杆菌革兰阴性：单胞菌、大肠埃希菌、产气肠杆菌、百日咳杆菌、军团菌?综合技能训练三痰液标本微生物检验

3、其他白念珠菌、隐球菌、曲霉菌、毛霉菌支原体、衣原体?综合技能训练三痰液标本微生物检验

二、检验方法与程序综合技能训练三痰液标本微生物检验

痰液标本的检验操作程序见下图痰液初步报告肉眼观察及涂片革兰染色镜检合格标本培养前处理不合格标本拒收及建议重新采集合格标本血平板（5%CO2环境）巧克力平板（5%CO2环境）麦康凯/中国蓝平板（需氧环境）CHROMagar（需氧环境）菌落观察涂片革兰染色镜检结合涂片结果和培养结果综合分析挑取可疑菌落纯培养细菌鉴定、药敏试验结果报告综合技能训练三痰液标本微生物检验

1、痰液标本的采集1）自然咳痰法2）小儿取痰法3）特殊器械采集法?综合技能训练三痰液标本微生物检验

2、痰液标本的运送痰液标本采集后应立即送检，室温保存不能超过2h，可选用运送培养基运送和保存标本，但也不应超过48h?综合技能训练三痰液标本微生物检验

3、对不合格痰液标本的处理对下列不合格的痰液标本应拒收：痰液标本呈水样或唾液样；痰涂片白细胞10个/LP，上皮细胞25个/LP；标本放置时间超过2h；未用指定的无菌容器留取痰液。?综合技能训练三痰液标本微生物检验

三、培养及鉴定综合技能训练三痰液标本微生物检验

1、涂片检查痰涂片进行革兰染色后，在低倍镜下检测20～40个视野，观察白细胞和上皮细胞数量的多少来初步判定标本是否合格?分级白细胞（个）/LP上皮细胞（个）/LPA2510B2510～25C2525C10～2525E1025痰标本镜下分类注：A、B标本适合培养，C、D、E为不合格标本，应重新留取标本综合技能训练三痰液标本微生物检验

1、涂片检查一般细菌涂片检查：取痰液的脓性或带血部分制成均匀薄片，进行革兰染色镜检，根据染色性、形态及排列初步报告。结核杆菌检查：取干酪样或脓性部分的痰液制成厚涂片，抗酸染色后镜检，根据所见结果报告找到抗酸杆菌或未找到抗酸杆菌。综合技能训练三痰液标本微生物检验

1、涂片检查放线菌及诺卡菌检查：将痰液用生理盐水反复洗涤数次，如含血液则加蒸馏水溶解红细胞，挑取黄色颗粒（硫磺样颗粒）或不透明的着色斑点，覆以盖玻片并轻轻压之，高倍镜下观察其结构，若查见革兰阳性的分枝菌丝、中间部分的菌丝为革兰阳性、四周放射的末端为革兰阴性，可报告疑似放线菌；如若见形态与放线菌相似，但菌丝末端不膨大，加做抗酸染色，呈弱阳性，可报告疑似诺卡菌。综合技能训练三痰液标本微生物检验

2、分离培养与鉴定痰培养的前处理痰液的洗净：将痰加入15～20ml无菌生理盐水的试管中，振荡5～10s后静置，用接种环将沉淀于管底的脓痰片沾出，放入另一试管内，以同样的方法反复洗涤3次，将洗涤后痰片接种在培养基上，主要是洗去痰中的正常菌群痰液的均质化：向痰液内加入等量pH7.6的1％胰酶溶液，置37℃水浴90min，即可使痰液均质化而对细菌培养无影响，此外还可以选用玻璃研磨。综合技能训练三痰液标本微生物检验

2、分离培养与鉴定普通细菌培养：将处理后的痰接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板、中国蓝/麦康凯琼脂平板上，分别放入普通和CO2环境，35℃培养18～24h后观察菌落特征。若平板上有细菌生长，辨别是病原菌还是条件致病菌，是一种菌还是多种菌。若平板上仅有正常菌群生长，则继续培养24h再观察，必要时培养至72h。综合技能训练三痰液标本微生物检验

2、分离培养与鉴定嗜肺军团菌培养：将均质化的标本接种于血琼脂、巧克力琼脂和BCYE琼脂平板上，置35℃，5％～10％CO2环境中培养。若在上述培养基中24h内有细菌生长，则此菌不是军