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基因工程课程教学大纲
GeneEngineering
学时数:32
其中:实验学时:
课外学时:
学分数:2
适用专业:生物技术专业
一、课程性质、目的和任务
性质:生物技术专业必修专业课。
目的:系统学习作为生物工程核心的基因工程,为以后学习和工作奠定坚实基础。
任务:通过本课程的学习,要求掌握基因工程的基本原理和各项常规基因操作技术,培养学
生利用基因工程手段解决实际问题的能力,为进一步学习、科研或工作打下重要基础。
二、课程教学的基本要求
(1)了解基因工程研究路线、研究内容以及基因工程研究发展前景。
(2)重点掌握基因工程基本原理和常规操作技术。
(3)了解基因工程安全管理条例。
三、课程教学内容、重点和难点
绪论
(一)基因工程研究概述:基因工程含义、理论依据、基本技术路线、发展史。
(二)基因工程研究内容:基础研究,应用研究。
(三)基因工程的安全性问题。
(四)基因工程研究发展前景。
重点:基因工程研究内容,基本技术路线及发展前景。
难点:基因工程基本技术路线。
第一章基因操作的主要技术原理
第一节DNA的提取与纯化
第二节DNA的凝胶电泳
第三节核酸的分子杂交
第四节基因扩增技术PCR
第五节DNA序列分析
重点:基因操作技术。
难点:基因操作技术原理及应用。
第二章基因克隆的酶学基础
(一)限制性内切酶:常用限制性内切酶的及其作用机制、识别位点、切割位点和Star活
性,DNA分子片段化及其限制性图谱。
(二)连接酶:连接酶作用机制及DNA片段的连接。
(三)DNA聚合酶:常用DNA聚合酶(Klenow酶、反转录酶等)的特性及DNA片段标
记。
(四)DNA及RNA的修饰酶:末端转移酶、碱性磷酸酶、T4多核苷酸激酶等修饰酶活性
及应用。
重点:基因克隆常用工具酶的作用。
难点:影响酶学活性的因素。
第三章基因克隆载体
(一)质粒克隆载体:相关的质粒性质,构建的基本策略及其构建。
(二)病毒克隆载体:λ噬菌体、cosmid、M13噬菌体克隆载体等。
(三)染色体定位整合克隆载体。
(四)人工染色体克隆载体:含义、特点、构建、应用。
(五)特殊用途克隆载体:启动子探针型克隆载体、诱导型表达克隆载体等。
重点:克隆载体的构成,用途。
难点:克隆载体的构成。
第四章目的基因的获取
(一)目的基因:组成、排列。
(二)目的基因的制备:直接分离法、基因组文库构建、cDNA基因文库的构建。
(三)目的基因的分离:功能克隆、序列克隆、差示分析法等。
重点:目的基因的排列,目的基因的制备和分离方法及原理。
难点:目的基因制备和分离。
第五章DNA体外重组与转化
第一节DNA片段的体外连接
一、粘性末端的连接
二、齐平末端(bluntend)的连接
三、PCR产物的连接
四、DNA体外连接应注意事项
五、载体分子和外源DNA插入片段的连接结果
第二节重组体导入细菌细胞
一、感受态大肠杆菌的制备
二、重组DNA导入大肠杆菌
重点:DNA重组连接及转化。
难点:DNA重组连接。
第六章重组体的选择和鉴定
第一节载体表型选择法
第二节根据插入序列的表型特征选择
第三节DNA电泳检测法
第
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