羊布鲁菌BtpA 和BtpB 基因缺失突变载体 .pdfVIP

中国动物传染病学报2022,30(6):19-26ChineseJournalofAnimalInfectiousDiseases

·研究论文·

羊布鲁菌BtpA和BtpB基因缺失突变载体的构建及生物

信息学分析

乔连江，张萍，周玉成，杨森，杨艳玲

（中国农业科学院特产研究所，长春130000）

摘要：为进一步研究布鲁菌IV分泌系统（T4SS）效应蛋白BtpA和BtpB的分子功能，本研究预构建羊布鲁菌BtpA和BtpB基因缺

失突变载体，并对其生物学功能进行简单的预测。本研究以羊布鲁菌流行菌株基因组为模板，分别设计了BtpA和BtpB基因上、

下游同源臂引物，通过PCR克隆技术得到了待融合基因片段。采用无缝克隆技术（in-fusioncloning），将待融合片段与线性化载

体PBK-CMV-SacB连接，经转化、阳性载体的筛选、PCR鉴定及DNA测序验证。并利用生信软件对BtpA和BtpB进行分析。结果表

明：PCR鉴定和基因测序显示BtpA和BtpB上、下游基因片段均成功连接到自杀载体上；生信分析显示，BtpA和BtpB序列同源性达

αBtpA和BtpB基因缺失突变

99％，不存在信号肽，二级结构以-螺旋为主，具有良好的反应原性。说明本试验成功构建了羊布鲁菌

载体，并对基因结构和功能进行了预测分析，为下一步研究布鲁菌的致病机制奠定了基础。

关键词：布鲁菌；Ⅳ分泌系统；无缝克隆技术；生信分析

中图分类号：S858.31文献标志码：A文章编号：1674-6422（2022）06-0019-08

BrucellamelitensisBTPABTPB

ConstructionoftheandGeneticDefectVectors

andAnalysisofBioinformatics

QIAOLianjiang,ZHANGPing,ZHOUYucheng,YANGSen,YANGYanling

(InstituteofSpecialEconomicAnimalandPlantSciences,CAAS,Changchun130000,China)

BtpABtpBBrucella

Abstract:TofurtherstudythemolecularfunctionsofandeffectorproteinsofⅣsecretionsystem,theaimofthe

BtpABtpBBrucella

andgenesofstandardstrain16Meffectorproteinandmake

presentstudywastoconstructgeneticdefectvectorsof

Brucella