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干旱锻炼对玉米B73自交后代响应干旱胁迫的生理指标及当代干旱胁迫记忆基因表达的影响

摘要

干旱是影响玉米生长发育及产量稳定的最主要的环境胁迫之一。实验以玉米B73为研究对象，探究干旱锻炼对玉米B73自交后代叶片生理特性及当代干旱胁迫记忆基因表达的影响。结果表明，相同干旱处理下，B73G1代叶片的各个生理指标,随干旱胁迫程度加重而提高，与此同时，G1代丙二醛（MDA）含量随干旱胁迫程度加重而减少,从而低于

G0代；干旱胁迫上调了GRMZM5G851862、GRMZM2G126505、GRMZM2G028535、GRMZM2G059836、GRMZM2G088396、

GRMZM2G079440基因的表达水平，且G1代6个基因表达水平比G0代要高。干旱锻炼可提高玉米自交后代的抗旱性，存在跨代干旱胁迫记忆。

关键词：玉米；干旱锻炼；干旱胁迫；生理指标；表达；跨代胁迫记忆

1前言

玉米(ZeaMaysL.)是我国第一大粮食作物,在世界各地上种植的谷类作物中,玉米的种植面积和总产量在小麦之下。玉米生长期较短,对干旱非常敏感,生长期内要求较高.玉米水需量大,如果降水少,灌溉水源不足,就会减少产量甚至颗粒无收。我国西部和西北部地区,干旱灾害发生频率较高.据估计,我国玉米平均每年因干旱而减产25%-30%,受害面积达458万hm2,严重受灾176万h2[1]。研究玉米的抗旱机制、培育抗旱新品种是目前亟待解决的问题，而弄清玉米跨代干旱胁迫记忆机制是解决这一问题的重要途径。

胁迫记忆（stressimprint）是指植物在遭受各种胁迫后，当再次面对生物和非生物胁迫（干旱、冷冻、高温、高盐等）时会出现更高耐受性的现象[2]。目前已经在小麦[3]、葡萄[4]、马铃薯[5]等多种植物中发现它们对过去经历的逆境胁迫具有记忆效应。2018年，“植物对逆境的记忆功能与进化”入选我国科学技术协会的60个重大科学问题和工程技术难题，掀起了胁迫记忆相关研究的热潮。通过研究发现，胁迫记忆可能是短期的，也可能是长期的，甚至可以通过某种未知的机制传递给子代，产生跨代胁迫记忆[5]。目前，大量证据表明，植物会对当代胁迫产生印记并表现出更为强烈的抵御机制[3-6]，但是关于跨代胁迫记忆方面的研究报道却很少。2009年，wittle等[7]发现F0及F1代拟南芥经高温胁迫后，其F3代仍具有较强的抵抗高温的能力；2015年，Shi等[8]发现水稻经高温胁迫锻炼后，其子代对高温的耐受性明显增强，这种现象同样也在马铃薯[5]、拟南芥[9]中被发现。

针对玉米跨代胁迫记忆的研究目前尚无报道，实验首次研究玉米模式自交系B73亲代干旱锻炼对其自交后代的影响。通过测定G0和G1代响应干旱胁迫时生理指标和当代干旱胁迫记忆基因表达的变异和传递规律，为后续跨代胁迫记忆机制研究奠定基础。

方法

材料预处理

玉米B73亲代干旱锻炼

玉米种子B73在正常水分条件下套袋授粉获得单株种子,并记为G0代,将2个品种G0代种子,采用纸皿法催芽,等到胚芽破胸露白时,挑选每个品种300粒发芽良好的种子,进行干旱锻炼：种子发芽之后放在干滤纸上,于23℃光照培养箱中干旱锻炼1h,之后放在湿纱布中,1d锻炼1次,连续锻炼5d,之后栽种于吉林农业科技学院玉米试验田,经套袋授粉后获得子代种子,记为G1代。

玉米B73自交后代干旱胁迫处理

G0和G1代玉米种子按上法催芽后,移至育苗盘中,在幼苗长到五叶一心时,取出幼苗,把根部泥沙洗净,把幼苗根部放入1/2MS液体培养基中适应2d,然后移入含20%PEG-6000[10]的1/2MS液体培养基中,分别浸泡0、1、2、3、4、5h后,每个品种处理25颗玉米苗混样,保存于-80℃中备用。

生理指标测定

叶片RWC测定

叶片相对含水量（英文全称，RWC）的测定按照马静文[11]的操作，采用测量方法进行。

将B73玉米幼苗叶片快速洗涤干燥，称重得到鲜重Wf，将B73玉米浸泡在去离子水中得到饱和鲜重Wt，然后将样品放入烤箱干燥称重得到结构干重Wd。

叶片RWC的计算公式为：

叶片RWC=（Wf–Wd）/Wt

叶片MDA测定

丙二醛含量（英文全称，MDA）的测定按照袁溢[12]的操作，采用硫代巴比妥酸方法进行。

称取1g玉米幼苗叶片,加入2mL0.1%的三氯乙酸（TCA）于研钵中充分研磨，在试管中倒入匀浆液,分别3m

L0.1%的三氯乙酸用冲洗研钵两次,进行研磨充分，并将组织液合并起来。然后加入5mL0.5%的硫代巴比妥酸,摇匀,100℃水浴,10min,取出放入冰水中冷后,3000rpm离心10min。量取上清液的体