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双光子荧光

目录1.研究背景2.基本原理3.特点及优点4.应用

1双光子荧光背景介绍双光子吸收是指在强光激发下,介质分子同时吸收两个光子,从基态跃迁到两倍光子能量的激发态的过程。早在1931年,GppertMayer就在理论上预言了双光子吸收的存在。直到上世纪60年代初激光器出现后,才由Kaiser等首先从实验上证实了双光子吸收过程。然而,由于一般材料的双光子吸收截面很小,双光子吸收的实际应用受到限制,使双光子吸收研究一直停留在基础研究水平。

1990年,美国康奈尔大学Denk等提出将双光子激发现象应用到共焦激光扫描显微镜中,开辟了双光子荧光显微和成像这个崭新的领域。

近年来,有机双光子吸收材料在诸多领域,尤其是双光子荧光显微和成像中的应用得到了广泛的关注。设计和合成双光子吸收截面大和上转换荧光强的有机分子能大大促进双光子荧光显微成像在生物系统中的应用,包括单分子检测、免疫测定、DNA片断测定、化学和生物传感器、生物微芯片、毛细管分离检测等。在大量的实验和理论研究基础上,人们总结出有机双光子吸收材料的一些结构-性能关系,提出了许多行之有效的设计及合成策略,大大推动了双光子吸收应用的发展。

2双光子荧光基本原理2.1单、双光子荧光的介绍在一般的荧光现象中，由于激发光的光子密度低，一个荧光分子只能同时吸收一个光子，再通过辐射跃迁发射一个荧光光子，就是单光子荧光。

与单光子相比，双光子激发过程就是基态荧光分子或原子同时吸收两个光子激发至激发态，通过弛豫过程，辐射出频率略小于两倍入射光频率的荧光光子。比如对NADH酶，在单光子激发情形下，需在350nm的光激发下产生450nm的荧光。而在双光子激发情形下，可采用光损伤较小的红外或近红外光，如700nm的激光来激发得到的450nm荧光。

2.2双光子吸收的示意图图(a)为单光子激发过程。在激光照射下，基态分子或原子吸收一个光子后成为激发态，随后又弛豫到某一基态，同时以光子形式释放能量而发出荧光。这一过程就是单光子激发。当使用光波长为图(a)中激发光波长两倍的光，对相同物质进行激发时，由于所使用光波的光子能量仅为原来的一半，无法通过单光子过程使基态电子激发到激发态。只有在光子密度极高的情况下，基态的电子可以同时吸收两个光子，使处于基态的电子跃迁至激发态，这种现象如图(b)所示。

图2a双光子吸收图2b单光子吸收S单重态能级T三重态能级V虚拟中间态hv吸收光能量Fl荧光Ph磷光Ⅺ系间窜越荧光物质在吸收了与其能级结构匹配的能量后，电子由基态S0被激发至激发态S1，经过辐射跃迁后电子又回到基态S0，这一过程中发射出荧光。与单光子荧光不同，双光子吸收过程中，基态与激发态之间存在一个虚能态,通过两个光子的能量进行叠加而使处于基态的电子达到激发态。

双光子荧光产生原理：荧光分子吸收第一个光子后，跃迁到虚能级上，该能级仅能存在几飞秒，便自动返回基态，第二个光子必须在这几飞秒内与虚能级上的分子作用，从基态跃迁到激发态，能量较大的激发态分子,通过内转换使自己回到最低电子激发态的最低振动能级。处于此能级的分子不是通过内转换的方式来消耗能量，回到基态，而是通过发射出相应的光量子来释放能量，回到基态的各个不同的振动能级时，就发射荧光。

3双光子荧光的特点及优点3.1特点：(1)双光子吸收的辐射光源一般在可见-近红外区(≥800nm)；(2)双光子吸收的强度与激发光强的平方成正比，是一种非线性吸收，荧光强度比单光子吸收强；

3.2优点(1)由于激发光源波长较长，受光散射影响较小，使得入射光的损耗较小，在介质中的穿透性较好；

3.2优点(2)双光子荧光使用红外激光作为激发光源，能大大地降低生物组织对激发光的吸收，可获得较强的样品荧光；

3.2优点(3)长波长光源作为双光子荧光的激发光源，可以避免样品中激发波长较低的自发荧光物质的干扰；

3.2优点(4)双光子荧光可以避免普通荧光成像中的荧光漂白问题和对生物细胞的光致毒问题；

3.2优点(5)双光子跃迁具有很强的选择激发性，有利于对生物组织中一些特殊物质进行成像研究，广泛应用于生物活体检测中。

4双光子荧光应用双光子荧光探针双光子荧光显微成像

双光子荧光探针设计原理探针分子组成：一是荧光团；二是离子团或称作受体作用机制：