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植物组织培养步骤

植物组织培养概念(广义)乂叫离体培养，指从植物体分离出符合需

要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件

下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的

技术。植物组织培养概念(狭义)指用植物各部分组织，如形成层.薄壁

组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各

器官上产生愈伤组织的培养,愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

组织培养的步骤

一、培养基配制

配制培养基有两种方法可以选择，一是购买培养基中所有化学药

品，

按照需要自己配制；二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉

剂，如MSB5等。

自己配制可以节约费用，但浪费时间、人力、且有时由丁药品的

质量问题，给实验带来麻烦。就目前国内的情况看，大部分还是自己

配制。为了方便起见，现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过

程。

1、配制几种母液

(1)配制MSfc!元素母液

一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释

100倍。

分别称取

NH4NO3165gKH2PO417gKNO3190gCaCl2?2H2O44g

MgSO47H2O37g

各自配成1L的母液。倒入1L试剂瓶中，存放丁冰箱中。

(2)配制MSa量元素母液

一般将微量元素配制成100倍母液。

依次称取

KI0.083gNa2MoO4-2H2O0.025g

H3BO30.62gCuSO45H2O0.0025g

MnSO4H2O1.69gCoCl2-6H2O0.0025g

ZnSO47H2O0.86g

配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放丁冰箱中。

CuSO45H2O和CoCl2?6H2。由丁称取量很小，如果天平精确

度没有

达到万分之一，可先配成调整液。

分别称取

CuSO45H2O0.05gCoCl2-6H2O0.05g

各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。

(3)配制MSt机母液

一般配制成100倍MS＜机母液。

依次称取

肌醇10g盐酸硫胺素(VB1)0.01g

烟酸0.05g甘氨酸0.2g

盐酸毗哆醇(VB6)0.05g

配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放丁冰箱中。

(4)配制MS铁盐母液

一般配制成100倍MS铁盐母液。

依次称取

EDTAT钠3.73gFeSO47H2O2.78g

配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放丁冰箱中。

所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS

有机母

液和MS铁盐母液，共8种母液。

激素母液的配制

各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素

类一

般要先用少量95%勺洒精或1当量的NaOH容解，细胞分裂素一

般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸僻水定容。一般取100mg配

成100ml母液。

2、配制培养基

以配置1LMS培养基为例，按顺序进行如下操作：

(1)先在烧杯中放入一些蒸僻水。

(2)分别取上面八种母液10ml倒入。

(3)一般称取30g蔗糖倒入，搅拌溶解。

(4)加蒸僻水用量筒定溶至1L。

(5)按设计好的方案添加各种激素，由丁激素的用量很小，而且激

素对组培植物的生长至关重要。所以有条件的话最好用微量可调移液

器吸取，减少误差